探讨早孕绒毛组织中胸腺活化调节趋化因子 (TARC) 及其特异性受体4 (CCR4) 的表达特征及生物学功能。
方法收集正常早孕 (孕6~ 8周) 妇女人工流产术后的绒毛组织,采用逆转录 (RT) PCR技术检测TARC、CCR4的mRNA表达水平;免疫组化法检测TARC、CCR4的蛋白表达水平。原代分离、培养绒毛外细胞滋养细胞,免疫荧光法检测TARC、CCR4蛋白在细胞水平的表达;体外侵袭实验检测不同浓度 (10、25、50、100 ng/ml) 的重组蛋白TARC (rh TARC) 与无血清RPMI 1640培养基 (对照组) 对绒毛外细胞滋养细胞系HTR8/SVneo细胞侵袭能力的影响;阻断试验检测TARC对细胞侵袭能力影响的特异性,实验分4组:对照组、100 ng/ml rh TARC组、100 ng/ml rh TARC+ 20μg/ml TARC抗体组、100 ng/ml rh TARC+ 20μg/ml Ig G组,检测各组HTR8/SVneo细胞的侵袭能力变化;蛋白印迹法检测100 ng/ml rh TARC组整合素α5及整合素β1蛋白表达水平。
结果(1) 体内试验:人早孕绒毛组织中均有TARC及CCR4 m RNA的表达;TARC蛋白主要表达于细胞滋养细胞、合体滋养细胞及滋养层柱的远端,CCR4蛋白特异性地表达于绒毛外间质细胞滋养细胞。 (2) 体外试验:①免疫荧光法检测显示,TARC、CCR4蛋白在绒毛外细胞滋养细胞中的表达均呈阳性;②体外侵袭实验显示,HTR8/SVneo细胞经10、25、50、100 ng/ml浓度的rh TARC处理后,细胞的侵袭能力逐渐增加,穿膜细胞数分别为 (142±31) 、 (161±46) 、 (201±30) 、 (312±48) 个,对照组为 (117±33) 个,与25 ng/ml rh TARC处理时的穿膜细胞数比较,差异有统计学意义 (P<0.05) ;100 ng/ml的rh TARC处理时,侵袭能力达高峰 (P<0.01) ;③阻断试验结果显示,100 ng/ml rhTARC组、100 ng/ml rh TARC+ 20μg/ml TARC抗体组、100 ng/ml rh TARC+ 20μg/ml Ig G组和对照组侵袭到小室对侧的细胞数分别为 (313±47) 、 (113±41) 、 (287±75) 、 (128±23) 个;④免疫印迹法检测结果显示,与对照组比较,100 ng/ml rh TARC组整合素α5的蛋白表达水平明显升高,整合素β1的蛋白表达水平也有所升高,差异均有统计学意义 (P<0.01,P<0.05) 。
结论TARC特异性地表达于人早孕绒毛,并通过上调整合素α5及整合素β1的蛋白表达增加滋养细胞的侵袭能力,可能在滋养细胞分化及胎盘形成过程中发挥重要作用。