【摘 要】
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本研究利用PCR方法从非洲猪瘟病毒的灭活样品中扩增出747bp的E248R基因全长序列,利用同源重组法构建原核表达质粒pCold I-pE248R,经1 mmol/L 的IPTG诱导1后,利用SDS-PAGE对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析,表达蛋白的分子量约为32 kDa,利用纯化后得到pE248R重组蛋白作为免疫原经过四次免疫后制备鼠源抗E248R多克隆抗体。利用该多克隆抗体检测实验室构建
【基金项目】
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国家自然科学基金ASFV专项(31941017); 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(Y2020YJ15); 广东省重点领域研发计划项目(2019B020211003);
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本研究利用PCR方法从非洲猪瘟病毒的灭活样品中扩增出747bp的E248R基因全长序列,利用同源重组法构建原核表达质粒pCold I-pE248R,经1 mmol/L 的IPTG诱导1后,利用SDS-PAGE对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析,表达蛋白的分子量约为32 kDa,利用纯化后得到pE248R重组蛋白作为免疫原经过四次免疫后制备鼠源抗E248R多克隆抗体。利用该多克隆抗体检测实验室构建并拯救的已证明能够稳定表达ASFV pE248R蛋白的重组病毒rPRRSV-E248R,结果显示制备的抗pE248R的多克隆抗体能够与rPRRSV-E248R发生特异性结合反应,证明利用本试验中原核表达的pE248R蛋白制备的多克隆抗体具有抗pE248R蛋白的特异性,为进一步针对ASFV E248R基因建立快速,特异性的血清学检测方法奠定了基础,也为针对pE248R蛋白的功能性研究提供了研究基础。
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