【摘 要】
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目的:研究钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaM-KII)和活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)是否参与急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)中肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTEC)凋亡并探讨其机制.方法:阿霉素(adriamycin,ADR)干预人近端肾小管上皮细胞HK-2建立RT
【机 构】
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广州医科大学附属第一医院肾内科,广东广州510120
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目的:研究钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaM-KII)和活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)是否参与急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)中肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTEC)凋亡并探讨其机制.方法:阿霉素(adriamycin,ADR)干预人近端肾小管上皮细胞HK-2建立RTEC凋亡模型,小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默NFAT基因,流式细胞术测细胞凋亡率.ADR干预6～8周龄雌性BALB/c小鼠建立AKI模型,将小鼠分为3组:正常对照组、ADR组和ADR+CaMKII抑制剂KN-93干预组,每组5只.酶联免疫吸附实验检测小鼠血清肌酐浓度.Western blot检测体内外Bax、Bcl-2、p-CaMKII、CaMKII及核NFAT的蛋白水平.结果:与正常对照组相比,ADR干预下,HK-2细胞凋亡率显著升高(P<0.01),小鼠血清肌酐和Bax蛋白表达显著升高,而Bcl-2蛋白表达显著下降(P<0.05).ADR干预下,HK-2细胞和小鼠肾组织中CaMKII活性(p-CaMKII/t-CaMKII)与核蛋白NFAT表达皆显著升高(P<0.01).ADR干预的HK-2细胞和小鼠中抑制CaMKII活性后,HK-2细胞凋亡率显著降低,小鼠血清肌酐和Bax蛋白表达显著回降,而Bcl-2蛋白表达显著回升,核蛋白NFAT表达显著回降(P<0.05).此外,用钙调蛋白激活CaMKII后HK-2细胞凋亡率显著升高(P<0.05);激活CaMKII同时予siRNA沉默NFAT,HK-2细胞凋亡率显著降低(P<0.05).结论:CaMKII/NFAT通路激活可促进AKI小鼠肾小管上皮细胞凋亡.
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