【摘 要】
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目的:构建人类免疫缺病毒Tat基因真核表达质粒,并研究该质粒在真核细胞中的有效表达.方法:以含有HIV-1全长基因的质粒pNL4-3为模板,通过PCR扩增HIV-1Tat第一外显子,应用基因
【机 构】
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四川省资阳市人民医院检验科(原四三一医院),641300
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目的:构建人类免疫缺病毒Tat基因真核表达质粒,并研究该质粒在真核细胞中的有效表达.方法:以含有HIV-1全长基因的质粒pNL4-3为模板,通过PCR扩增HIV-1Tat第一外显子,应用基因工程技术将扩增的基因片段插入真核表达质粒pCDNA3.1(+),构建重组真核表达质粒pCDNA3.1-tat,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,应用脂质体转染技术转染入huh-7细胞.RT-PCR检测其基因转录情况,WesternBlot鉴定其是否能够表达相应的目的蛋白质.结果:成功扩增了Tat基因,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pCDNA3.1-tat,RT-PCR证实该质粒能在huh-7真核细胞中有效表达Hiv-1Tat目的片段. 结论:成功构建了HIV-1Tat基因的真核表达质粒载体,并在huh-7中表达,为在huh-7细胞模型中研究Tat的功能奠定了基础.
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