【摘 要】
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目的构建大鼠血红素加氧酶1(HO-1)基因重组慢病毒载体lenti-EGFP-HO-1，并检测其在骨髓间充质干细胞(BMSC)中的表达效率。方法利用聚合酶链反应技术(PCR)扩增rat-HO-1基因，并克隆到pGV287-EGFP载体中，行PCR及测序鉴定所构建的重组质粒pGV287-EGFP-HO-1；将重组质粒pGV287-EGFP-HO-1及辅助包装质粒pHelper1.0、pHelper1
【机 构】
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100037 合肥，安徽医科大学海军临床学院,100037 北京，中国人民解放军海军总医院医务部,100037 合肥，安徽医科大学海军临床学院；100037 北京，中国人民解放军海军总医院呼吸内科,1
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目的构建大鼠血红素加氧酶1(HO-1)基因重组慢病毒载体lenti-EGFP-HO-1，并检测其在骨髓间充质干细胞(BMSC)中的表达效率。
方法利用聚合酶链反应技术(PCR)扩增rat-HO-1基因，并克隆到pGV287-EGFP载体中，行PCR及测序鉴定所构建的重组质粒pGV287-EGFP-HO-1；将重组质粒pGV287-EGFP-HO-1及辅助包装质粒pHelper1.0、pHelper1.0共转染293细胞进行重组慢病毒lenti-EGFP-HO-1的包装，并采用荧光标记法检测病毒滴度，再进一步感染BMSC，荧光显微镜下观察感染效果、Western blot检测BMSC内HO-1表达情况。
结果大鼠HO-1基因扩增产物大小为911 bp，与目的基因相关片段中HO-1 cDNA大小一致。阳性克隆行PCR后形成498 bp，其大小与目的片段大鼠HO-1 cDNA相当，进一步测序鉴定提示与GenBank信息库中rat-HO-1基因mRNA一致。重组慢病毒lenti-GV287-EGFP-HO-1滴度为2×108 TU/ml，感染BMSC后可观察到报告基因EGFP表达，慢病毒lenti-GV287-EGFP-HO-1感染组中可检测到HO-1蛋白表达。
结论本研究成功构建了重组慢病毒载体lenti-GV287-EGFP-HO-1，并能够在BMSC中高效表达，为进一步探索HO-1基因修饰间充质干细胞在肺损伤中的作用奠定了基础。
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