人MAdCAM-1胞外区基因在原核系统的表达及重组蛋白纯化

来源 :细胞与分子免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yokuchan
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目的制备高纯度的重组人MAdCAM-1蛋白。方法采用PCR技术从pUC21/hMAdCAM-1质粒上,选择性扩增编码成熟MAdCAM-1胞外区两个Ig域的基因片段。将其克隆至pQE30载体中,转化大肠杆菌后,以IPTG诱导表达,产物经Ni-NTA亲和层析纯化。结果诱导表达出相对分子质量(Mr)约29 000的融合蛋白。薄层凝胶扫描显示,其表达量占菌体总蛋白质的50%左右。经亲和层析纯化得到高纯度的蛋白产品。结论获得了重组人MAdCAM-1胞外区蛋白,为后续功能研究及其单抗研制奠定了基础。
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