【摘 要】
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目的 探讨可溶性血管内皮生长因子受体sKDR对膀胱癌T24细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 RT-PCR方法提取KDR胞外血管内皮生长因子(VEGF)结合区编码基因,构建真核分泌型表
【机 构】
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吉林大学第二医院泌尿外科,吉林大学基础医学院细胞生物教研室
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目的 探讨可溶性血管内皮生长因子受体sKDR对膀胱癌T24细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 RT-PCR方法提取KDR胞外血管内皮生长因子(VEGF)结合区编码基因,构建真核分泌型表达质粒pCI-KDR,脂质体法转染至T24细胞,经G418抗性压力筛选稳定转染细胞株.ELISA法检测细胞培养上清VEGF结合活性,筛选稳定表达sKDR的T24细胞株,RT-PCR检测细胞KDR基因表达水平,四甲基偶氮唑盐比色法测定sKDR对T24细胞及人脐静脉内皮细胞(HUVEC)生长增殖的影响,流式细胞仪观察细胞周期及凋亡情况. 结果稳定表达sKDR的T24细胞KDR mRNA表达水平(0.665±0.048)明显高于空质粒对照组(0.160±0.015)(P＜0.0001),细胞增殖水平下降了55.1%(P＜0.0001),其细胞培养上清抑制HUVEC增殖的能力提高了41.6%(P＜0.0001),出现了明显的G0/G1期阻滞(P=0.0078)和细胞凋亡(凋亡率12.7%).结论 靶向KDR的sKDR通过干扰VEGF/KDR的信号传导通路可抑制膀胱癌T24细胞及HUVEC在体外的生长速度,KDR有可能成为新的膀胱癌抗血管生成治疗靶点.
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