【摘 要】
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目的:高效扩增NK细胞,并确定其对不同肿瘤的杀伤作用,为临床应用提供参考。方法:从成人外周血中分离PBMCs并利用表面表达4-1BBL、IL-15和IL-21的K562滋养细胞对其进行共刺激
【机 构】
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老年性疾病干细胞技术国家地方联合工程研究中心
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目的:高效扩增NK细胞,并确定其对不同肿瘤的杀伤作用,为临床应用提供参考。方法:从成人外周血中分离PBMCs并利用表面表达4-1BBL、IL-15和IL-21的K562滋养细胞对其进行共刺激培养,15 d后计数并检测CD3~-CD56~+细胞纯度;利用间接免疫荧光及Real-time PCR方法检测NK细胞Granzyme B及Perforin表达变化的同时检测其对肺癌、胃癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌、宫颈癌的杀伤作用,确定其对不同肿瘤的杀伤效果。结果:扩增15 d后,细胞数量高于110亿,CD3~-CD56~+比例达95%以上;培养后的NK细胞高表达Granzyme B、Perforin,且对A549的杀伤效果(E∶T=10∶1)约为90%,同时对其他肿瘤细胞(E∶T=10∶1)的杀伤效果由强到弱的顺序为:胃癌、胰腺癌、宫颈癌、卵巢癌、肾癌、肝癌(P<0.05);NK细胞对宫颈癌、肝癌、胰腺癌的杀伤效果呈现一定的时间依赖性。结论:此方法可以扩增出高数量、高纯度的NK细胞,同时该NK细胞具有高效杀伤多种肿瘤细胞的能力。
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