【摘 要】
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目的: 分离出乙酰肝素酶(heparanase, HPA)全长编码基因并在哺乳动物细胞中表达出有活性的HPA;探索此酶在哺乳动物细胞中的表达特性;并建立稳定表达该酶的细胞株. 方法:通过P
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目的: 分离出乙酰肝素酶(heparanase, HPA)全长编码基因并在哺乳动物细胞中表达出有活性的HPA;探索此酶在哺乳动物细胞中的表达特性;并建立稳定表达该酶的细胞株. 方法:通过PCR法从人胎盘cDNA文库中扩增HPA蛋白全长编码基因;构建真核表达载体,转化COS-7细胞进行瞬时表达;分析HPA蛋白的活性和表达特性;转化入CHO细胞以筛选恒定表达该酶的细胞株. 结果:分离扩增出1629 bp的人HPA全长cDNA序列并构建了其真核表达载体;在转染后的COS-7细胞和筛选出的CHO细胞裂解液中检测到较高的HPA活性和相对分子质量(Mr)大小约53×103的目的蛋白免疫印迹表达带. 结论:本研究分离出人HPA编码基因全序列;在真核细胞内成功表达出有活性的人HPA,发现此酶在COS-7和CHO细胞中表达在细胞内,很少分泌到细胞外;筛选出其恒定表达细胞株,为进一步研究HPA结构功能、开发其抗体及抑制剂提供了有力的工具.
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