【摘 要】
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目的 探讨沉默组蛋白赖氨酸去甲基化酶5A(KDM5A)基因表达对卵巢癌顺铂(DDP)耐药细胞SKOV3/DDP迁移及侵袭的影响.方法 通过RNAi技术将细胞分为3组:转染沉默组(SKOV3/DDP-KDM5
【机 构】
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湖北省妇幼保健院妇科 湖北 武汉 430070;湖北省妇幼保健院生殖中心 湖北 武汉 430070;广西医科大学区域性高发肿瘤早期防治研究教育部重点实验室,广西 南宁 530021
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目的 探讨沉默组蛋白赖氨酸去甲基化酶5A(KDM5A)基因表达对卵巢癌顺铂(DDP)耐药细胞SKOV3/DDP迁移及侵袭的影响.方法 通过RNAi技术将细胞分为3组:转染沉默组(SKOV3/DDP-KDM5 Ai)、阴性对照组(SKOV3/DDP-NC)和未转染的空白对照组(SKOV3/DDP),蛋白质印迹法验证KDM5A基因的沉默效果,划痕实验检测3组细胞的迁移能力,Transwell侵袭实验检测3组细胞的侵袭能力,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测3组细胞中β-catenin、糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)和基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达变化情况.采用单因素方差分析法比较各组间差异.结果 转染沉默组、阴性对照组及空白组细胞中KDM5A蛋白的相对表达量分别为0.3274±0.04、0.8019±0.05和0.8218±0.05,差异有统计学意义,F=131.466,P<0.001;其中,沉默组的表达强度低于阴性对照组(t=13.744,P<0.001)和空白组(t=14.323,P<0.001),差异有统计学意义.划痕实验结果显示,转染沉默组、阴性对照组及空白组细胞的划痕愈合率分别为(28.47±2.72)％、(50.58±4.06)％和(48.92±4.63)％,差异有统计学意义,F=30.158,P=0.007;其中,沉默组细胞的划痕愈合率低于阴性对照组(t=6.973,P<0.001)和空白组(t=6.447,P<0.001),差异有统计学意义.侵袭实验结果显示,转染沉默组、阴性对照组及空白组细胞的穿膜细胞数分别为(55.20±2.39)、(82.60±5.18)和(80.80±7.26)个,差异有统计学意义,F=41.354,P<0.001;其中,沉默组细胞的侵袭能力低于阴性对照组(t=8.129,P=0.005)和空白组(t=7.595,P=0.007),差异有统计学意义.RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果显示,沉默组β-catenin、GSK-3β和MMP2的mRNA及蛋白表达水平低于阴性对照组和空白组,差异有统计学意义,P<0.01.结论 沉默KDM5 A基因可显著抑制SKOV3/DDP细胞的迁移及侵袭能力,这一过程可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关.
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