【摘 要】
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目的:探讨靶向沉默信息调控因子2同源蛋白2(SIRT2)表达对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)耐药细胞株HL-60/A凋亡的影响及其潜在机制。方法:采用Western blot分别
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目的:探讨靶向沉默信息调控因子2同源蛋白2(SIRT2)表达对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)耐药细胞株HL-60/A凋亡的影响及其潜在机制。方法:采用Western blot分别检测HL-60/A及对药物相对敏感的亲代细胞株HL-60中SIRT2及自噬相关蛋白LC3、P62的表达。采用si RNA转染HL-60/A细胞,靶向抑制SIRT2表达后,采用Annexin V/PI双染法检测阿糖胞苷对HL-60/A细胞细胞凋亡的影响;采用Western blot和透射电子显微镜检测HL-60/A细胞的自噬影响。为明确自噬在SIRT2对HL-60/A耐药调节中的确切作用,在SIRT2沉默后加入自噬特异性激动剂雷帕霉素,再分别检测对HL-60/A细胞自噬与凋亡的影响。结果:HL-60/A细胞中SIRT2、LC3 Ⅱ/Ⅰ蛋白表达量较HL-60细胞明显增高(P<0.05),但P62表达显著降低(P<0.05)。siRNA成功转染HL-60/A细胞后,SIRT2表达量显著降低(P<0.05);LC3 Ⅱ/Ⅰ蛋白表达明显下降(P<0.05),同时P62蛋白表达上升;自噬体数目显著降低(P<0.05)。这提示,自噬受到抑制。SIRT2被沉默后, HL-60/A对阿糖胞苷的药敏性增加,细胞凋亡率显著上升(P<0.05)。而当加入雷帕霉素后,siRNA转染组中受到抑制的细胞自噬被激活,HL-60/A细胞重新表现出对阿糖胞苷的耐药性,细胞凋亡率较其他组明显下降(P<0.05)。结论:SIRT2的高表达激活了HL-60/A细胞保护性自噬机制,且与其耐药性密切相关。
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