【摘 要】
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目的探讨不同浓度骨髓间充质干细胞(BMSCs)对调节性T细胞/辅助性T细胞17(Treg / Th17)的影响。方法SPF级雄性Wistar大鼠,选择3周龄、体重约50 g大鼠体外分离培养BMSCs,待细胞传代培养至第4代时进行鉴定;另选择6周龄、体重约200 g大鼠分离CD4+ T淋巴细胞,用流式细胞仪检测细胞纯度。按BMSCs细胞浓度分为0.5倍浓度组、基础浓度组、2倍浓度组和4倍浓度组,细胞
【机 构】
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天津市第一中心医院移植外科,天津市器官移植重点实验室,天津市器官移植临床医学研究中心 300192,天津市第一中心医院移植外科,天津市器官移植重点实验室,天津市器官移植临床医学研究中心 300192,
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目的探讨不同浓度骨髓间充质干细胞(BMSCs)对调节性T细胞/辅助性T细胞17(Treg / Th17)的影响。
方法SPF级雄性Wistar大鼠,选择3周龄、体重约50 g大鼠体外分离培养BMSCs,待细胞传代培养至第4代时进行鉴定;另选择6周龄、体重约200 g大鼠分离CD4+ T淋巴细胞,用流式细胞仪检测细胞纯度。按BMSCs细胞浓度分为0.5倍浓度组、基础浓度组、2倍浓度组和4倍浓度组,细胞浓度分别为每孔1×105、2×105、4×105、8×105个,分别与CD4+ T淋巴细胞混合培养72 h。用流式细胞仪检测各组Treg和Th17细胞比例,用流式微球分析技术检测相关细胞因子含量。
结果BMSCs和CD4+ T淋巴细胞的纯度均在95%以上。不同浓度BMSCs与CD4+ T淋巴细胞共培养后,Treg细胞比例在不同浓度BMSCs组间差异有统计学意义(F=10.071,P=0.001),以2倍浓度组BMSCs对Treg细胞的促增殖作用最强,Treg细胞比例明显高于0.5倍浓度、基础浓度和4倍浓度组〔(9.24±2.68)%比(3.87±0.38)%、(5.16±1.69)%、(3.86±0.36)%,均P<0.01〕。Treg相关因子白细胞介素-10(IL-10)水平在0.5倍浓度组最低,且明显低于基础浓度、2倍浓度和4倍浓度组(ng/L:39.80±14.48比148.43±64.49、156.40±59.27、126.92±42.95,均P<0.05);转化生长因子-β(TGF-β)水平在基础浓度组最高,且明显高于0.5倍浓度、2倍浓度和4倍浓度组〔ng/L:3.17(1.88,5.74)比0.71(0.32,1.38)、1.22(0.47,2.97)、0.52(0.37,1.23),均P<0.05〕。Th17细胞比例在不同浓度组间差异有统计学意义(F=21.069,P=0.000),以基础浓度组Th17细胞比例最高,且明显高于0.5倍浓度和4倍浓度组〔(0.89±0.08)%比(0.64±0.15)%、(0.37±0.10)%,均P<0.01〕,而与2倍浓度组〔(0.83±0.06)%〕比较差异无统计学意义(P>0.05)。Th17相关因子IL-17、IL-6水平在不同浓度组间差异均无统计学意义(IL-17:χ2=0.550,P=0.760;IL-6:χ2=0.010,P=0.995)。
结论适中浓度的BMSCs 〔(2~4)×105个〕对大鼠Treg、Th17细胞均有促进作用,但浓度过高(8×105个)对二者的促进作用则消失;Treg / Th17平衡相关细胞因子与细胞比例的变化是不同步的。
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