【摘 要】
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目的 初步确立hBMSCs的二维生物打印方法 ,实现对细胞喷射过程的控制并保持打印后细胞活力. 方法 取健康志愿者骨髓5 mL,常规培养hBMSCs至第2代,调整为1×106个/mL单细胞悬液
【机 构】
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上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科,上海,200011;上海市组织工程研究重点实验室;上海大学快速成型中心
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目的 初步确立hBMSCs的二维生物打印方法 ,实现对细胞喷射过程的控制并保持打印后细胞活力. 方法 取健康志愿者骨髓5 mL,常规培养hBMSCs至第2代,调整为1×106个/mL单细胞悬液.实验分3组:打印组1细胞先行碘化丙啶(propidium iodide,PI)荧光标记,快速成型组织打印机进行二维细胞打印,x轴间隔300 μm,Y轴间隔1 500μm,激光共聚焦显微镜观察.打印组2细胞未行PI标记,经生物打印后培养2 h,Live/Dead viability Kit测定细胞活力,激光共聚焦显微镜观察细胞荧光染色情况;取1份未经Live/Dead viability Kit测试的打印组2细胞,培养7d后倒置显微镜观察细胞形态,贴壁后常规培养,动态观察细胞生长状态.对照组除细胞悬液不行打印,其余操作同打印组2. 结果 打印组1细胞激光共聚焦显微镜观察,“细胞墨滴”在二维组织中规则且均匀分布,满足二维设计细胞打印要求;每个“细胞墨滴”包含细胞15～35个.打印组2细胞经活力测试,细胞孵育30 min后激光共聚焦显微镜观察显示细胞荧光染色情况.对照组细胞活力与打印组2无明显区别.打印后细胞常规培养7 d,细胞可正常贴壁生长,形态、生长状态良好. 结论 通过生物打印技术可实现hBMSCs在二维平面上的定向、定量规则分布,并为进一步的细胞三维打印乃罕器官打印体系奠定基础.
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