乳腺珠蛋白基因的克隆及重组蛋白的表达和纯化

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目的克隆人乳腺珠蛋白(hMaM)基因,获得高纯度hMaM重组蛋白。方法从人乳腺癌组织提取总RNA,逆转录合成cDNA,设计特异引物,用PCR方法扩增获得目的片段,利用T/A克隆将PCR产物插入pMD-18T载体。利用BamHI+XhoI双酶切方法将目的基因导入表达载体,阳性质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,通过IPTG诱导获得重组蛋白,并用His-Select^TM和Sephadex-G100进行纯化。结果用RT-PCR方法获得279bp的片段,克隆至T载体后经DNA测序,结果与预期序列一致。表达质粒
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