探讨小RNA干扰靶向抑制Par-4基因表达对人骨髓间充质干细胞凋亡的影响。

原代培养人骨髓间充质干细胞，谷氨酸诱导凋亡。设计和合成针对Par-4基因mRNA的siRNA(Par-4-siRNA)，构建真核细胞表达载体，用脂质体介导转染人骨髓间充质干细胞，利用G418筛选稳定表达细胞株。实时荧光定量PCR(real-time PCR)法检测Par-4 mRNA的表达量。流式细胞术测定细胞凋亡百分率。Western blot测定磷酸化(Thr308)的蛋白激酶Akt1蛋白表达量。比色法测定Caspase-3酶活性。

筛选出的Par-4-SiRNA-1、2显著抑制人骨髓间充质干细胞中Par-4基因的mRNA表达，mRNA水平分别降低88%、67%。在谷氨酸诱导后24 h，人骨髓间充质干细胞发生凋亡，百分率为60.30%±6.82%。Par-4-SiRNA-1、2都显著抑制谷氨酸的诱导作用，凋亡百分率降为38.80%±3.97%(P<0.01)和45.49%±4.32%(P<0.01)。谷氨酸诱导后24 h人骨髓间充质干细胞中磷酸化Akt1蛋白表达下调(89.07±6.42和28.30±5.65，P<0.01)，而Par-4- SiRNA-1、2对之下调都有显著抑制作用(63.56±6.75和45.59±4.88,均有P<0.01)。谷氨酸诱导后24 h人骨髓间充质干细胞中Caspase-3酶活性上调(0.1428±0.0495和0.8616±0.1051, P<0.01)，而Par-4-SiRNA-1、2对之上调都有显著抑制作用(0.6581±0.0555和0.7041±0.0401,均有P<0.01)。

小RNA干扰可靶向抑制Par-4基因的表达，拮抗谷氨酸诱导的人骨髓间充质干细胞的凋亡。