【摘 要】
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选择合适的内参基因是利用实时荧光定量PCR准确分析基因相对表达量的先决条件。基于现有对内参基因的研究,本研究挑选出10个基因作为小麦条锈菌(Puccinia striiformis f.sp.t
【基金项目】
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国家公益性(农业)行业科技专项(No.200903035-02);国家现代农业产业技术体系建设专项(No.nycytx-03);高等学校学科创新引智计划(No.B07049)
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选择合适的内参基因是利用实时荧光定量PCR准确分析基因相对表达量的先决条件。基于现有对内参基因的研究,本研究挑选出10个基因作为小麦条锈菌(Puccinia striiformis f.sp.tritici)的候选内参基因。经过PCR扩增效率筛选,8个基因符合要求可用于稳定度的筛选,这些基因包括泛素连接酶(UBC)、泛素连接酶E2(UBCE2)、核糖体蛋白S5(RPS5)、α微管蛋白(TUBA)、β肌动蛋白(ACTB)、β微管蛋白(TUBB)、延伸因子1(EF1)和延伸因子3(EF3)。本研究以两种小麦条锈菌(CYR32和Pst78)的夏孢子、萌发芽管分别接种两个小麦(Triticum aestivam)品种(CYR32/XZ9104和Pst78/AvS)后0.5、3和14d的样品为材料,利用实时荧光定量PCR技术,检测了这8个持家基因在不同发育阶段的小麦条锈菌中的表达情况。经geNorm软件分析发现,3个持家基因在样品中的表达趋势与小麦条锈菌的侵染过程相符合。ACTB、TUBB和TUBA的组合可作为检测小麦条锈菌基因表达的内参基因。
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