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摘 要 为筛选党参根腐病最佳抑菌化学药剂，在实验室条件下，采用生长速率法，选择苯醚甲环唑、甲基硫菌灵、噁霉灵、十三吗啉、噻呋酰胺、福美双6种常见杀菌剂，每种药剂设置5个浓度梯度，开展室内毒力测定试验，研究其菌落生长及抑制效果。结果表明：十三吗啉、甲基硫菌灵对菌丝生长有明显抑制作用，苯醚甲环唑、噁霉灵、噻呋酰胺能有效减少病菌色素分泌。十三吗啉、甲基硫菌灵、苯醚甲环唑对党参根腐病菌的生长有明显抑制作用，EC50分别为0.46×10-3、 0.852×10-3、1.31×10-3 g·L-1;福美双、噁霉灵对其抑制作用稍弱，EC50分别为154.99×10-3、435.31×10-3 g·L-1。噻呋酰胺对该病菌基本没有抑制效果。
关键词 党参根腐病;杀菌剂;室内毒力测定
中图分类号：S435.672 文献标志码：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2021.25.007
药材党参为桔梗科植物党参的干燥根，功效与人参相似，为常用药材。党参味甘性平，入脾、肺經，是补气养血的常见药材。随着党参种植面积的持续扩大，部分地区连作重茬等，病害问题已逐渐成为影响党参产量和品质的重要因素之一，其中根腐病是发生最为常见且严重的病害[1]，根腐病菌的厚垣孢子抗逆性强，在无寄主存在时也可在土壤中存活多年，导致发生愈加严重。党参根腐病于4月中下旬发生，平均病株率相对较低，在8月病株率最高。早期发病时，侧根表面或下部须根初现褐色小斑点，轻度腐烂，随后逐渐蔓延到主根，根部自下向上逐步腐烂，出现黑褐色水渍状病斑。发病后，地上部茎和叶随着根的腐烂由下而上逐渐变黄，以致枯死。如发病较晚，秋后剩下部分多为半截参。次年春天，留下的半截参虽可发芽出苗，但不久便会继续腐烂，地上部叶片也相应变黄，逐渐枯死[2]。根腐病常常导致党参产量下降，质量变劣，有的甚至完全失去药用价值，给药农造成极大损失。根腐病菌的小种较多，各地区的发生及防控各有差异，尤其重庆气候湿润，更适合党参根腐病的发生，导致目前重庆党参根腐病的防控难度较大。本文针对重庆地区分离出的致病菌进行最佳抑菌剂的筛选试验，希望筛选出较为理想的防治杀菌剂，为该病的综合防控提供一定依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 供试菌株
从重庆奉节党参（川党参 Codonopsis tangshen Oliv.）种植基地采集的根腐组织上分离所得菌株，本文编号为P5。
1.1.2 供试杀菌剂
此次试验选取市面上常见的，可用于防治根腐病的6种杀菌剂（见表1）。
1.1.3 培养基
马铃薯琼脂培养基（简称PDA）：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂17 g，蒸馏水1 L。
清水琼脂培养基（简称WA）：琼脂30 g，蒸馏水1 L。
1.2 试验方法
1.2.1 菌株分离
组织分离：将生病根部切成约5 cm长的小段，浸泡于75%酒精中约30 s后，在0.1%升汞水溶液中浸约1 min，后用无菌水换洗3次，放在干燥的无菌纸上吸干水分后，用灭菌手术刀在病害标本病健交界处切取边长为3 mm左右的立方块组织，并将其移置于PDA培养基平板中央，将培养皿倒置于25 ℃恒温培养箱中培养3～5 d后观察。
单孢分离：在超净工作台上，用无菌手术刀将WA平板切成边长约为1.0 cm×2.0 cm的块状，放置在灭菌载玻片上，并将其平均切成8块0.5 cm×0.5 cm的小块。使用针灸针沾取根腐病菌分离物，连续在8块WA平板上各轻触1下，随后在4×10倍显微镜下观察孢子。最后将沾有单孢的琼脂块，转移至PDA中央，倒置于25 ℃恒温培养箱中培养，保存备用。
1.2.2 含毒介质制备
将供试杀菌剂按照表2对应的质量浓度配置成不同浓度含毒培养基，以无杀菌剂加入的PDA平板作为对照[3]。每皿培养皿倒入20 mL培养基，每个杀菌剂浓度5个重复。
1.2.3 不同化学杀菌剂对党参根腐病病原菌菌落生长的抑制作用
菌丝生长速率法：使用直径为5 mm的无菌打孔器在菌落样本边缘处打下菌饼[3]。取菌饼移入对应培养基中心位置，使用封口膜密封培养皿边缘使之隔绝污染，用标签作相对应标记，将平板放置于25 ℃恒温条件下培养。接种后，在培养第3 d、5 d、7 d时，采用十字交叉法测量菌落直径，并按照如下公式，计算6种杀菌剂对应的抑制生长率。
[抑制生长率=（1-处理菌落直径-菌饼直径对照菌落直径-菌饼直径）×100%]
1.2.4 数据整理
以杀菌剂质量浓度的对数值为x，抑制率值为y，使用Excel进行回归分析，得毒力回归方程y=ax+b，求出决定系数（R2）及EC50。使用DPS 9.01对数据进行方差分析。
2 结果与分析
2.1 杀菌剂处理P5后菌落生长情况
试验结果表明，在相同浓度处理下，6种不同药剂对P5菌落的生长抑制作用有明显影响。十三吗啉、甲基硫菌灵、苯醚甲环唑、福美双对P5均有明显抑制作用，噁霉灵对其抑制作用稍差，噻呋酰胺对其抑制作用不明显。其中十三吗啉、甲基硫菌灵明显优于其他杀菌剂的处理，实际观察发现，这两种杀菌剂处理下的P5菌落生长边缘不平整，说明菌丝的生长受到较大阻碍。其余菌落边缘生长平滑，说明其余4种杀菌剂对菌丝的生长形态没有太大影响。此外，从各菌落培养基颜色来看，各杀菌剂对P5分泌色素的能力有一定影响。十三吗啉、甲基硫菌灵处理下的菌落培养基颜色偏红且较深，说明药剂并未过多减少其色素的产生。福美双处理下的菌落培养基稍红但颜色较浅，说明该药较前两种药剂，对其色素的分泌起到了更大程度的抑制。苯醚甲环唑、噁霉灵、噻呋酰胺处理下的菌落培养基颜色几乎没有变化，说明3种药剂较好地抑制了P5分泌色素。 2.2 生长速率法测定各杀菌剂的抑制作用
从表3可以看出，各药剂的EC50值差异较大，苯醚甲环唑、甲基硫菌灵、十三吗啉对P5的生长抑制作用明显优于其他几种杀菌剂，说明P5对这几种杀菌剂更为敏感，其中十三吗啉的抑制作用最好。福美双、噁霉灵对P5的生长抑制作用稍弱，但其用量也低于生产上常规剂量，说明其抑制效果也较好。而24%噻呋酰胺的EC50值高达55 258.62×10-3 g·L-1，抑制效果不明顯。
从表4置信区间数据可以看出，苯醚甲环唑和十三吗啉、甲基硫菌灵和十三吗啉对P5的生长抑制作用差异不显著，其余各药剂相互间对P5的生长抑制作用的差异显著，说明药剂间的抑制作用差异明显。
比较组别中：1. 苯醚甲环唑，2. 噁霉灵，3. 甲基硫菌灵，4. 噻呋酰胺，5. 福美双，6. 十三吗啉
3 讨论
本文的毒力回归方程能够有效地反映出不同浓度的杀菌剂与抑制菌落生长的关系，本次试验采用菌丝生长速率法测定了6种杀菌剂对党参根腐病的室内毒力，结果表明，6种杀菌剂对党参根腐病病菌P5的抑制作用由强到弱顺序为十三吗啉>甲基硫菌灵>苯醚甲环唑>福美双>噁霉灵>噻呋酰胺。十三吗啉、甲基硫菌灵对菌丝生长有明显抑制，苯醚甲环唑、噁霉灵、噻呋酰胺能有效减少病菌色素分泌。十三吗啉、苯醚甲环唑、甲基硫菌灵对P5生长抑制作用最好，噁霉灵、福美双对P5生长抑制作用稍弱;噻呋酰胺抑制效果最差，在生产上不作推荐。
十三吗啉、甲基硫菌灵、苯醚甲环唑、福美双、噁霉灵这5种杀菌剂均有抗菌谱较广、高效、低毒的特点，对本试验中的病菌P5有较好的抑制效果。建议生产上可多种杀菌剂交替使用，以有效控制党参根腐病害，防止病原菌对某种单一试剂产生抗药性。
室内药剂筛选试验结果仅代表药剂与病原菌直接接触时，药剂对病原菌生长的抑制效果，而药剂在田间对病害的实际防治效果还与药剂作用机理、施药方式、施药天气状况等因素有关。下一步可选用在室内毒力测定中对党参根腐病病菌抑制效果较好的杀菌剂进行后续试验。
参考文献：
[1] 孙新荣，仲彩萍，张西梅，等.甘肃定西地区党参根腐病病原鉴定与防治研究[J].植物保护，2020，46（5）：290-297.
[2] 余中莲，雷美艳，蒲盛才，等.重庆党参真菌病害种类调查及病原鉴定[J].中药材，2015，38（6）：1119-1122.
[3] 陈雨姗，尹群，王杰，等.红花玉兰根腐病化学防治药剂的室内筛选及毒力测定[J].东北林业大学学报，2020，48（9）：107-113.
（责任编辑：丁志祥）
关键词 党参根腐病;杀菌剂;室内毒力测定
中图分类号：S435.672 文献标志码：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2021.25.007
药材党参为桔梗科植物党参的干燥根，功效与人参相似，为常用药材。党参味甘性平，入脾、肺經，是补气养血的常见药材。随着党参种植面积的持续扩大，部分地区连作重茬等，病害问题已逐渐成为影响党参产量和品质的重要因素之一，其中根腐病是发生最为常见且严重的病害[1]，根腐病菌的厚垣孢子抗逆性强，在无寄主存在时也可在土壤中存活多年，导致发生愈加严重。党参根腐病于4月中下旬发生，平均病株率相对较低，在8月病株率最高。早期发病时，侧根表面或下部须根初现褐色小斑点，轻度腐烂，随后逐渐蔓延到主根，根部自下向上逐步腐烂，出现黑褐色水渍状病斑。发病后，地上部茎和叶随着根的腐烂由下而上逐渐变黄，以致枯死。如发病较晚，秋后剩下部分多为半截参。次年春天，留下的半截参虽可发芽出苗，但不久便会继续腐烂，地上部叶片也相应变黄，逐渐枯死[2]。根腐病常常导致党参产量下降，质量变劣，有的甚至完全失去药用价值，给药农造成极大损失。根腐病菌的小种较多，各地区的发生及防控各有差异，尤其重庆气候湿润，更适合党参根腐病的发生，导致目前重庆党参根腐病的防控难度较大。本文针对重庆地区分离出的致病菌进行最佳抑菌剂的筛选试验，希望筛选出较为理想的防治杀菌剂，为该病的综合防控提供一定依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 供试菌株
从重庆奉节党参（川党参 Codonopsis tangshen Oliv.）种植基地采集的根腐组织上分离所得菌株，本文编号为P5。
1.1.2 供试杀菌剂
此次试验选取市面上常见的，可用于防治根腐病的6种杀菌剂（见表1）。
1.1.3 培养基
马铃薯琼脂培养基（简称PDA）：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂17 g，蒸馏水1 L。
清水琼脂培养基（简称WA）：琼脂30 g，蒸馏水1 L。
1.2 试验方法
1.2.1 菌株分离
组织分离：将生病根部切成约5 cm长的小段，浸泡于75%酒精中约30 s后，在0.1%升汞水溶液中浸约1 min，后用无菌水换洗3次，放在干燥的无菌纸上吸干水分后，用灭菌手术刀在病害标本病健交界处切取边长为3 mm左右的立方块组织，并将其移置于PDA培养基平板中央，将培养皿倒置于25 ℃恒温培养箱中培养3～5 d后观察。
单孢分离：在超净工作台上，用无菌手术刀将WA平板切成边长约为1.0 cm×2.0 cm的块状，放置在灭菌载玻片上，并将其平均切成8块0.5 cm×0.5 cm的小块。使用针灸针沾取根腐病菌分离物，连续在8块WA平板上各轻触1下，随后在4×10倍显微镜下观察孢子。最后将沾有单孢的琼脂块，转移至PDA中央，倒置于25 ℃恒温培养箱中培养，保存备用。
1.2.2 含毒介质制备
将供试杀菌剂按照表2对应的质量浓度配置成不同浓度含毒培养基，以无杀菌剂加入的PDA平板作为对照[3]。每皿培养皿倒入20 mL培养基，每个杀菌剂浓度5个重复。
1.2.3 不同化学杀菌剂对党参根腐病病原菌菌落生长的抑制作用
菌丝生长速率法：使用直径为5 mm的无菌打孔器在菌落样本边缘处打下菌饼[3]。取菌饼移入对应培养基中心位置，使用封口膜密封培养皿边缘使之隔绝污染，用标签作相对应标记，将平板放置于25 ℃恒温条件下培养。接种后，在培养第3 d、5 d、7 d时，采用十字交叉法测量菌落直径，并按照如下公式，计算6种杀菌剂对应的抑制生长率。
[抑制生长率=（1-处理菌落直径-菌饼直径对照菌落直径-菌饼直径）×100%]
1.2.4 数据整理
以杀菌剂质量浓度的对数值为x，抑制率值为y，使用Excel进行回归分析，得毒力回归方程y=ax+b，求出决定系数（R2）及EC50。使用DPS 9.01对数据进行方差分析。
2 结果与分析
2.1 杀菌剂处理P5后菌落生长情况
试验结果表明，在相同浓度处理下，6种不同药剂对P5菌落的生长抑制作用有明显影响。十三吗啉、甲基硫菌灵、苯醚甲环唑、福美双对P5均有明显抑制作用，噁霉灵对其抑制作用稍差，噻呋酰胺对其抑制作用不明显。其中十三吗啉、甲基硫菌灵明显优于其他杀菌剂的处理，实际观察发现，这两种杀菌剂处理下的P5菌落生长边缘不平整，说明菌丝的生长受到较大阻碍。其余菌落边缘生长平滑，说明其余4种杀菌剂对菌丝的生长形态没有太大影响。此外，从各菌落培养基颜色来看，各杀菌剂对P5分泌色素的能力有一定影响。十三吗啉、甲基硫菌灵处理下的菌落培养基颜色偏红且较深，说明药剂并未过多减少其色素的产生。福美双处理下的菌落培养基稍红但颜色较浅，说明该药较前两种药剂，对其色素的分泌起到了更大程度的抑制。苯醚甲环唑、噁霉灵、噻呋酰胺处理下的菌落培养基颜色几乎没有变化，说明3种药剂较好地抑制了P5分泌色素。 2.2 生长速率法测定各杀菌剂的抑制作用
从表3可以看出，各药剂的EC50值差异较大，苯醚甲环唑、甲基硫菌灵、十三吗啉对P5的生长抑制作用明显优于其他几种杀菌剂，说明P5对这几种杀菌剂更为敏感，其中十三吗啉的抑制作用最好。福美双、噁霉灵对P5的生长抑制作用稍弱，但其用量也低于生产上常规剂量，说明其抑制效果也较好。而24%噻呋酰胺的EC50值高达55 258.62×10-3 g·L-1，抑制效果不明顯。
从表4置信区间数据可以看出，苯醚甲环唑和十三吗啉、甲基硫菌灵和十三吗啉对P5的生长抑制作用差异不显著，其余各药剂相互间对P5的生长抑制作用的差异显著，说明药剂间的抑制作用差异明显。
比较组别中：1. 苯醚甲环唑，2. 噁霉灵，3. 甲基硫菌灵，4. 噻呋酰胺，5. 福美双，6. 十三吗啉
3 讨论
本文的毒力回归方程能够有效地反映出不同浓度的杀菌剂与抑制菌落生长的关系，本次试验采用菌丝生长速率法测定了6种杀菌剂对党参根腐病的室内毒力，结果表明，6种杀菌剂对党参根腐病病菌P5的抑制作用由强到弱顺序为十三吗啉>甲基硫菌灵>苯醚甲环唑>福美双>噁霉灵>噻呋酰胺。十三吗啉、甲基硫菌灵对菌丝生长有明显抑制，苯醚甲环唑、噁霉灵、噻呋酰胺能有效减少病菌色素分泌。十三吗啉、苯醚甲环唑、甲基硫菌灵对P5生长抑制作用最好，噁霉灵、福美双对P5生长抑制作用稍弱;噻呋酰胺抑制效果最差，在生产上不作推荐。
十三吗啉、甲基硫菌灵、苯醚甲环唑、福美双、噁霉灵这5种杀菌剂均有抗菌谱较广、高效、低毒的特点，对本试验中的病菌P5有较好的抑制效果。建议生产上可多种杀菌剂交替使用，以有效控制党参根腐病害，防止病原菌对某种单一试剂产生抗药性。
室内药剂筛选试验结果仅代表药剂与病原菌直接接触时，药剂对病原菌生长的抑制效果，而药剂在田间对病害的实际防治效果还与药剂作用机理、施药方式、施药天气状况等因素有关。下一步可选用在室内毒力测定中对党参根腐病病菌抑制效果较好的杀菌剂进行后续试验。
参考文献：
[1] 孙新荣，仲彩萍，张西梅，等.甘肃定西地区党参根腐病病原鉴定与防治研究[J].植物保护，2020，46（5）：290-297.
[2] 余中莲，雷美艳，蒲盛才，等.重庆党参真菌病害种类调查及病原鉴定[J].中药材，2015，38（6）：1119-1122.
[3] 陈雨姗，尹群，王杰，等.红花玉兰根腐病化学防治药剂的室内筛选及毒力测定[J].东北林业大学学报，2020，48（9）：107-113.
（责任编辑：丁志祥）