【摘 要】
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为探讨聚合酶链反应-高分辨率熔解曲线(PCR-HRM)技术在检测呼吸道菌群中的应用,本研究用支气管镜从慢性阻塞性肺病患者下呼吸道采集分泌液,提取细菌总DNA,以16S通用引物27F/1
【机 构】
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首都医科大学医学实验与测试中心,济宁医学院药学院2013年级药物制剂技术,首都医科大学附属友谊医院妇产科,首都医科大学附属北京天坛医院急诊科
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为探讨聚合酶链反应-高分辨率熔解曲线(PCR-HRM)技术在检测呼吸道菌群中的应用,本研究用支气管镜从慢性阻塞性肺病患者下呼吸道采集分泌液,提取细菌总DNA,以16S通用引物27F/1492R扩增16S rDNA全长,PCR产物经电泳、纯化后连接到pGEMT-Easy载体上,构建16SrDNA克隆文库。然后以16S rDNA V3区通用引物338F/518R扩增克隆文库,V3区PCR-HRM分析在罗氏LightCycler 480实时荧光定量PCR系统中进行,采用HRM基因扫描软件分析数据。根据不同HRM图型,挑选克隆株测序并鉴定菌株。结果显示,PCR-HRM技术可灵敏区分下呼吸道不同细菌16SrDNA V3区,根据HRM图谱可极大减少克隆菌株测序样本,提示PCR-HRM技术可作为一种快速、高通量、敏感、经济的菌群多样性检测方法。
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