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摘要：目的：探讨高危HPV结合分型检测与宫颈癌生物的相关性。方法：选择2010年5月～2013年5月为我院收治的宫颈癌患者279例，采用HC II技术以及HybriMax技术检测HPV DNA病毒载量以及病毒分型，分析高危型HPV分型与宫颈癌生物学的相关性。结果：本组279例患者中，其中检出高危HPV DNA阳性患者258例，检出阳性率为92.47%；在HPV DNA基因型多重感染上，I-II期患者检出阳性率为13.27%、III-IV期患者检出阳性率为23.53%，二者比较，差异具有统计学意义（p<0.05）；在HPV 18基因型上，鳞癌患者检出阳性率为6.8%、非鳞癌患者检出阳性率为18.75%，二者比较，差异具有统计学意义（p<0.05）；在各HPV DNA基因型上，不同组织分化患者检出阳性率之间差异均不具有统计学意义（p>0.05）。结论：：宫颈癌患者病情越严重其多重感染的检出率越高，且不同高危HPV分型与宫颈癌生物学行为具有着一定的相关性。
关键词：高危HPV；宫颈癌；相关性Abstract：Objective： To investigate the correlation of HPV with high risk genotypes and cervical cancer biology. Methods： in 2010 May ～2013 year in May 279 cases with cervical cancer patients， using the HC II technology and HybriMax technology in detection of HPV DNA viral load and virus types， analysis of the correlation between high-risk HPV subtypes and cervical cancer biology. Results： This group of 279 patients， including 258 cases of high-risk HPV detection of DNA positive patients， the positive rate was 92.47%； in the HPV genotype DNA infected patients with multiple， I-II positive rate was 13.27%， III-IV positive rate was 23.53% in patients， a comparison of the two， the difference was statistically significant （p<0.05）； HPV genotype in 18 patients with squamous cell carcinoma， the positive rate was 6.8%， the positive rate in patients with non squamous cell carcinoma was 18.75% two， comparison， the difference was statistically significant （p<0.05）； in the HPV genotype of DNA gene， the difference between different tissue differentiation in patients with positive rate were not statistically significant （p>0.05）. Conclusion： the patients with cervical cancer disease severity of the multiple infection rate is higher， and different high risk type of HPV and the biological behavior of cervical cancer have a certain correlation.
Key words：High risk HPV； Cervical cancer； Correlation
【中图分类号】R453【文献标识码】 A【文章编号】1002-3763（2014）09-0053-02宫颈癌是仅次于乳腺癌的全球第二常见的妇女癌症。现代研究已经公认了人乳头状瘤病毒（HPV）的感染是造成宫颈癌的一个主要病因[1]。由于高危型人乳头状瘤病毒的持续感染能够造成子宫癌前期病变以及宫颈癌的发生[2]。而HPV其具有着多种基因型，但是不同基因分型与宫颈癌生物学之间的相关性仍然未能获得研究者的共识。本研究探讨高危HPV结合分型检测与宫颈癌生物学行为之间的相关性，现报告如下：
1 资料与方法
1.1 临床资料
选择2010年5月～2013年5月為我院收治的宫颈癌患者279例，患者年龄在24～68岁之间，平均年龄为41.49岁，79例入组患者均经过病理学诊断确诊为宫颈癌。按照国际妇产科联盟标准临床分期[3]，其中I期患者97例、II期患者114例、III期患者67例、IV期患者1例；按照WHO组织学类型标准[4]，其中鳞癌患者247例、非鳞癌患者32例；按照WHO组织分化标准[5]，其中高分化患者19例、中分化患者185例、低分化患者75例。
1.2 仪器与试剂
ABI7700荧光定量PCR仪、凯普HybriMax杂交仪；DNA提取试剂盒（德国QIAGEN）、PCR扩增试剂盒（购于新朝阳生物有限公司）、杂交试剂盒（购于新朝阳生物有限公司）。 1.3 研究方法
1.3.1 标本采集
在非月经期进行采样，患者才进行采样的浅3天之内不能够使用阴道栓剂、采用的前一天禁止性生活。采样时由医生使用窥器将患者子宫颈暴露，将其宫颈分泌物擦去后用专用GPV采用刷与宫颈口顺时针旋转5周后停留10秒钟，将其立即放入专用试管中（内含细胞保存剂），封盖后将其置于4℃冰箱内保存待检测，需在2周之内完成检测。
1.3.2 病毒载量检测
采用HC II 检测患者HPV DNA载量，共检测13种高危型HPV，他们是：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68。检测步骤严格按照试剂盒说明书进行，当RLU/阳性对照RLU在1.0以上时则作为HPV DNA 阳性。
1.3.3 病毒分型检测
采用HybriMax技术检测患者HPV DNA分型，共检测21种亚型，其中低危亚型6种，分别是：6、11、42、43、44、HPVcp8340；高危亚型15种，分别为：16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68。
1.4 统计学处理
采用统计学软件SPSS 19.0对数据进行统计分析，结果采用X2检验，以p<0.05作为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 高危型HPV DNA阳性率
本组279例患者中，其中检出高危HPV DNA阳性患者258例，检出阳性率为92.47%。
2.2 不同临床分期患者HPV DNA分型分别情况
不同临床分期患者HPV DNA分型分布情况见表1， 在HPV DNA基因型多重感染上，I-II期患者检出阳性率为13.27%、III-IV期患者检出阳性率为23.53%，二者比较，差异具有统计学意义（p<0.05）；而在其他HPV DNA基因型上，不同临床分期患者之间阳性率不具有统计学差异（p>0.05）。
表1 不同临床分期患者HPV DNA分型情况 [n（%）]
HPV基因型临床分期I-II期（n=211）III-IV期（n=68）X2P值16109（51.66）32（47.06）0.4350.0591816（7.58）8（11.76）1.1440.2855812（5.69）4（5.82）0.0040.9525211（5.21）3（4.41）0.0690.792337（3.32）2（2.94）0.0230.879其他8（3.79）2（4.41）0.1080.743多重感染28（13.27）16（23.53）4.0750.0442.3 不同组织学类型患者HPV DNA 分型分布情况：不同组织学类型患者HPV DNA分型分布见表2，在HPV 18基因型上，鳞癌患者检出阳性率为6.8%、非鳞癌患者检出阳性率为18.75%，二者比较，差异具有统计学意义（p<0.05）；在其他各HPV DNA基因型上，不同组织学类型患者检出阳性率不具有统计学显著性差异（p>0.05）。
表2 不同组织学类型患者HPV DNA 分型分布 [n（%）]
HPV DNA分型不同组织学类型鳞癌（n=247）非鳞癌（n=32）X2P值16129（52.22）14（43.75）0.8150.3671816（6.8）6（18.75）5.8740.0155815（6.73）2（6.25）0.0020.9695213（5.26）2（6.25）0.0520.820337（2.83）1（3.13）0.0090.926其他17（6.88）2（6.25）0.0180.894多重感染31（12.96）3（9.38）0.2670.6052.3 不同组织分化患者HPV DNA分型：不同组织分化患者HPV DNA分型分布情况见表3，在各HPV DNA基因型上，不同组织分化患者检出阳性率之间差异均不具有统计学意义（p>0.05）。
表3 不同组织分化患者HPV DNA分型分布 [n（%）]
HPV DNA分型不同组织分化高/中分化（n=204）低分化（n=75）X2P值16103（50.49）36（48.00）0.1360.7121812（5.88）6（8.00）0.4070.5235811（5.39）3（4.00）0.2230.6375213（6.37）6（8.00）0.0460.830336（2.94）3（4.00）0.1970.657其他14（6.86）4（5.33）0.2130.645多重感染29（14.21）12（16.00）0.1390.7093 讨论
现代医学研究表明，发生宫颈癌及其癌前的病变其中一个必要条件为高危型HPV的持续感染，此观点已经获得全球妇科学者之间的共识[6]。通过高危型HPV DNA的检测，能够从病因学的水平将即将发生或者已经发生的宫颈癌病变筛选出来[7]。而近些年以来，我国研究者运用分子生物学的技术对高危型HPV DNA 进行筛查，其中HC II便是其中发展较为迅速且运用简单、可靠的一种分子生物学技术[8-9]。在本研究中，运用HC II技术对我院宫颈癌患者279例进行筛查，结果显示，我院279例患者中，高危型HPV检出阳性率为92.47%。该阳性率略低于文献报道数据[10-11]，究其原因可能为：①采用HC II仅针对的是13种特定的HPV高危分型，但是对于某些高危分型却未包括；②可能由于临床医生在取样时存在操作上的差异，可能对样本中获取的宫颈脱落细胞数目造成影响，从而使得检测结果有所差异；③由于患者组织细胞缺氧所造成的组织细胞坏死可能导致HPV DNA发生丢失。
现已确定的发生宫颈癌最为主要的原因为高危型HPV持续性的感染以及反复感染，而不同的HPV基因亚型其编码外壳蛋白的基因具有着较大的差异，而在不同HPV基因亚型之间没有具有交叉保护抗体，因此患者发生不同高危型HPV的多重感染以及交叉感染[12]。国外研究者报道称[13]，感染单一的HPV患宫颈癌的风险较常人增加19.9倍，而若感染多重HPV则使得患宫颈癌的风险较常人增加31.8倍；但是同时也有研究者表示[14-15]，HPV多重感染并不會使得宫颈癌的患病率有所增加。在本研究中，不同临床分期患者在多重感染上存在差异，III-IV期患者其多重感染检出率显著高于I-II期患者，表明了病情越严重的患者其多重感染的检出率越高。此外研究显示，在HPV 18基因型上，鳞癌患者检出阳性率为6.8%、非鳞癌患者检出阳性率为18.75%，二者比较，差异具有统计学意义（p<0.05）。表明了不同高危HPV分型与宫颈癌生物学行为具有着一定的相关性，而二者之间明确的关系还有待进一步大样本研究结果。
综上所述，宫颈癌患者病情越严重其多重感染的检出率越高，且不同高危HPV分型与宫颈癌生物学行为具有着一定的相关性。
参考文献
[1]杨雪， 附舰， 康艳霞， 等. 调强适形放射治疗联合每周紫杉醇+ 卡铂方案在宫颈癌术前同步放化疗的临床观察[J]. 中国肿瘤临床与康复， 2013 （9）： 1027-1028.
关键词：高危HPV；宫颈癌；相关性Abstract：Objective： To investigate the correlation of HPV with high risk genotypes and cervical cancer biology. Methods： in 2010 May ～2013 year in May 279 cases with cervical cancer patients， using the HC II technology and HybriMax technology in detection of HPV DNA viral load and virus types， analysis of the correlation between high-risk HPV subtypes and cervical cancer biology. Results： This group of 279 patients， including 258 cases of high-risk HPV detection of DNA positive patients， the positive rate was 92.47%； in the HPV genotype DNA infected patients with multiple， I-II positive rate was 13.27%， III-IV positive rate was 23.53% in patients， a comparison of the two， the difference was statistically significant （p<0.05）； HPV genotype in 18 patients with squamous cell carcinoma， the positive rate was 6.8%， the positive rate in patients with non squamous cell carcinoma was 18.75% two， comparison， the difference was statistically significant （p<0.05）； in the HPV genotype of DNA gene， the difference between different tissue differentiation in patients with positive rate were not statistically significant （p>0.05）. Conclusion： the patients with cervical cancer disease severity of the multiple infection rate is higher， and different high risk type of HPV and the biological behavior of cervical cancer have a certain correlation.
Key words：High risk HPV； Cervical cancer； Correlation
【中图分类号】R453【文献标识码】 A【文章编号】1002-3763（2014）09-0053-02宫颈癌是仅次于乳腺癌的全球第二常见的妇女癌症。现代研究已经公认了人乳头状瘤病毒（HPV）的感染是造成宫颈癌的一个主要病因[1]。由于高危型人乳头状瘤病毒的持续感染能够造成子宫癌前期病变以及宫颈癌的发生[2]。而HPV其具有着多种基因型，但是不同基因分型与宫颈癌生物学之间的相关性仍然未能获得研究者的共识。本研究探讨高危HPV结合分型检测与宫颈癌生物学行为之间的相关性，现报告如下：
1 资料与方法
1.1 临床资料
选择2010年5月～2013年5月為我院收治的宫颈癌患者279例，患者年龄在24～68岁之间，平均年龄为41.49岁，79例入组患者均经过病理学诊断确诊为宫颈癌。按照国际妇产科联盟标准临床分期[3]，其中I期患者97例、II期患者114例、III期患者67例、IV期患者1例；按照WHO组织学类型标准[4]，其中鳞癌患者247例、非鳞癌患者32例；按照WHO组织分化标准[5]，其中高分化患者19例、中分化患者185例、低分化患者75例。
1.2 仪器与试剂
ABI7700荧光定量PCR仪、凯普HybriMax杂交仪；DNA提取试剂盒（德国QIAGEN）、PCR扩增试剂盒（购于新朝阳生物有限公司）、杂交试剂盒（购于新朝阳生物有限公司）。 1.3 研究方法
1.3.1 标本采集
在非月经期进行采样，患者才进行采样的浅3天之内不能够使用阴道栓剂、采用的前一天禁止性生活。采样时由医生使用窥器将患者子宫颈暴露，将其宫颈分泌物擦去后用专用GPV采用刷与宫颈口顺时针旋转5周后停留10秒钟，将其立即放入专用试管中（内含细胞保存剂），封盖后将其置于4℃冰箱内保存待检测，需在2周之内完成检测。
1.3.2 病毒载量检测
采用HC II 检测患者HPV DNA载量，共检测13种高危型HPV，他们是：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68。检测步骤严格按照试剂盒说明书进行，当RLU/阳性对照RLU在1.0以上时则作为HPV DNA 阳性。
1.3.3 病毒分型检测
采用HybriMax技术检测患者HPV DNA分型，共检测21种亚型，其中低危亚型6种，分别是：6、11、42、43、44、HPVcp8340；高危亚型15种，分别为：16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68。
1.4 统计学处理
采用统计学软件SPSS 19.0对数据进行统计分析，结果采用X2检验，以p<0.05作为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 高危型HPV DNA阳性率
本组279例患者中，其中检出高危HPV DNA阳性患者258例，检出阳性率为92.47%。
2.2 不同临床分期患者HPV DNA分型分别情况
不同临床分期患者HPV DNA分型分布情况见表1， 在HPV DNA基因型多重感染上，I-II期患者检出阳性率为13.27%、III-IV期患者检出阳性率为23.53%，二者比较，差异具有统计学意义（p<0.05）；而在其他HPV DNA基因型上，不同临床分期患者之间阳性率不具有统计学差异（p>0.05）。
表1 不同临床分期患者HPV DNA分型情况 [n（%）]
HPV基因型临床分期I-II期（n=211）III-IV期（n=68）X2P值16109（51.66）32（47.06）0.4350.0591816（7.58）8（11.76）1.1440.2855812（5.69）4（5.82）0.0040.9525211（5.21）3（4.41）0.0690.792337（3.32）2（2.94）0.0230.879其他8（3.79）2（4.41）0.1080.743多重感染28（13.27）16（23.53）4.0750.0442.3 不同组织学类型患者HPV DNA 分型分布情况：不同组织学类型患者HPV DNA分型分布见表2，在HPV 18基因型上，鳞癌患者检出阳性率为6.8%、非鳞癌患者检出阳性率为18.75%，二者比较，差异具有统计学意义（p<0.05）；在其他各HPV DNA基因型上，不同组织学类型患者检出阳性率不具有统计学显著性差异（p>0.05）。
表2 不同组织学类型患者HPV DNA 分型分布 [n（%）]
HPV DNA分型不同组织学类型鳞癌（n=247）非鳞癌（n=32）X2P值16129（52.22）14（43.75）0.8150.3671816（6.8）6（18.75）5.8740.0155815（6.73）2（6.25）0.0020.9695213（5.26）2（6.25）0.0520.820337（2.83）1（3.13）0.0090.926其他17（6.88）2（6.25）0.0180.894多重感染31（12.96）3（9.38）0.2670.6052.3 不同组织分化患者HPV DNA分型：不同组织分化患者HPV DNA分型分布情况见表3，在各HPV DNA基因型上，不同组织分化患者检出阳性率之间差异均不具有统计学意义（p>0.05）。
表3 不同组织分化患者HPV DNA分型分布 [n（%）]
HPV DNA分型不同组织分化高/中分化（n=204）低分化（n=75）X2P值16103（50.49）36（48.00）0.1360.7121812（5.88）6（8.00）0.4070.5235811（5.39）3（4.00）0.2230.6375213（6.37）6（8.00）0.0460.830336（2.94）3（4.00）0.1970.657其他14（6.86）4（5.33）0.2130.645多重感染29（14.21）12（16.00）0.1390.7093 讨论
现代医学研究表明，发生宫颈癌及其癌前的病变其中一个必要条件为高危型HPV的持续感染，此观点已经获得全球妇科学者之间的共识[6]。通过高危型HPV DNA的检测，能够从病因学的水平将即将发生或者已经发生的宫颈癌病变筛选出来[7]。而近些年以来，我国研究者运用分子生物学的技术对高危型HPV DNA 进行筛查，其中HC II便是其中发展较为迅速且运用简单、可靠的一种分子生物学技术[8-9]。在本研究中，运用HC II技术对我院宫颈癌患者279例进行筛查，结果显示，我院279例患者中，高危型HPV检出阳性率为92.47%。该阳性率略低于文献报道数据[10-11]，究其原因可能为：①采用HC II仅针对的是13种特定的HPV高危分型，但是对于某些高危分型却未包括；②可能由于临床医生在取样时存在操作上的差异，可能对样本中获取的宫颈脱落细胞数目造成影响，从而使得检测结果有所差异；③由于患者组织细胞缺氧所造成的组织细胞坏死可能导致HPV DNA发生丢失。
现已确定的发生宫颈癌最为主要的原因为高危型HPV持续性的感染以及反复感染，而不同的HPV基因亚型其编码外壳蛋白的基因具有着较大的差异，而在不同HPV基因亚型之间没有具有交叉保护抗体，因此患者发生不同高危型HPV的多重感染以及交叉感染[12]。国外研究者报道称[13]，感染单一的HPV患宫颈癌的风险较常人增加19.9倍，而若感染多重HPV则使得患宫颈癌的风险较常人增加31.8倍；但是同时也有研究者表示[14-15]，HPV多重感染并不會使得宫颈癌的患病率有所增加。在本研究中，不同临床分期患者在多重感染上存在差异，III-IV期患者其多重感染检出率显著高于I-II期患者，表明了病情越严重的患者其多重感染的检出率越高。此外研究显示，在HPV 18基因型上，鳞癌患者检出阳性率为6.8%、非鳞癌患者检出阳性率为18.75%，二者比较，差异具有统计学意义（p<0.05）。表明了不同高危HPV分型与宫颈癌生物学行为具有着一定的相关性，而二者之间明确的关系还有待进一步大样本研究结果。
综上所述，宫颈癌患者病情越严重其多重感染的检出率越高，且不同高危HPV分型与宫颈癌生物学行为具有着一定的相关性。
参考文献
[1]杨雪， 附舰， 康艳霞， 等. 调强适形放射治疗联合每周紫杉醇+ 卡铂方案在宫颈癌术前同步放化疗的临床观察[J]. 中国肿瘤临床与康复， 2013 （9）： 1027-1028.