【摘 要】
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目的应用TaqMan PCR技术建立针对Flanders病毒(Flanders virus,FLAV)的实时荧光定量PCR检测方法。方法下载GenBank中FLAV基因序列资料并进行多序列比对分析,选择其L基因中的
【机 构】
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中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所; 哈尔滨医科大学;
【基金项目】
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国家科技重大专项项目(No.2013ZX10004-101)~~
论文部分内容阅读
目的应用TaqMan PCR技术建立针对Flanders病毒(Flanders virus,FLAV)的实时荧光定量PCR检测方法。方法下载GenBank中FLAV基因序列资料并进行多序列比对分析,选择其L基因中的高保守序列片段进行FLAV特异引物与探针的设计,使用来自于不同科属的15株病毒验证方法特异性,通过重复/平行实验验证方法稳定性,并利用体外转录的L基因RNA标准品建立基因拷贝数绝对定量分析模型。结果引物与探针工作特异性良好,同一样品重复检测Ct值的变异系数均小于1.7%,定量分析模型灵敏度达到100copies/PCR。结论建立完成针对FLAV的TaqMan PCR检测方法。实验结果显示,本方法具有高特异性、高敏感性、高稳定性、简便、易操作的特点,为今后对FLAV的检测、监测及相关研究提供技术手段。
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