【摘 要】
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目的:建立人牙囊细胞( dental follicle cells,DFCs)的体外培养方法,为牙周组织工程研究提供可靠的种子细胞来源.方法:分离人8月龄胚胎下颌磨牙牙胚,胰酶消化后分离牙囊组织,
【机 构】
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南方医科大学附属南方医院口腔科,第四军医大学口腔医学院组织工程实验中心,第四军医大学口腔医院牙体科
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划)
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目的:建立人牙囊细胞( dental follicle cells,DFCs)的体外培养方法,为牙周组织工程研究提供可靠的种子细胞来源.方法:分离人8月龄胚胎下颌磨牙牙胚,胰酶消化后分离牙囊组织,采用胶原酶消化法和组织块法相结合原代培养人牙囊细胞,利用牙囊细胞和上皮根鞘细胞对胰酶的耐受性差别分离纯化,通过倒置显微镜及HE 染色观察细胞形态及生长状况、透射电镜观察细胞的超微结构;采用免疫组化波形丝蛋白(vimemtin,Vim)、角蛋白(cytokeration,CK)、Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen, ColⅠ)、Ⅲ型胶原(type Ⅲ collagen,Col Ⅲ)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)和早期矿化相关的标志骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨涎蛋白(bone sialapretion,BSP)的表达情况对细胞做表型鉴定.结果:原代培养的人牙囊细胞生长良好,但其中混有少量上皮根鞘细胞,经传代可完全分离,传至11代仍保持原有活力;牙囊细胞为长梭型,成纤维样;电镜下见细胞核浆比例大,核仁明显,含有溶酶体、大量的粗面内质网和发达的高尔基体,含有大量的中间丝.电镜结果显示细胞代谢旺盛,增殖活性高,含有牙囊细胞特有的高密度电子颗粒,免疫组化Vim、ColⅠ、ColⅢ、FN、OPN、BSP呈阳性着色,抗角蛋白呈阴性着色.结论:本实验培养的是牙囊细胞,体外培养的人牙囊细胞在较长时间内可保持其特性,细胞具有成骨细胞的某些表型特征,有望成为牙周组织工程研究的种子细胞.
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