【摘 要】
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目的观察反义血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因转染对喉癌生长的影响.方法克隆人VEGF基因,将VEGF-互补DNA(complementary DNA,cDNA)反向克隆到真核表达载体pcDNA3,构建反义(以负号表示)VEGF表达载体pcDNA3-VEGF(-);利用阳离子脂质体作为载体,转染人喉癌Hep-2细胞;将转染细胞注入
【机 构】
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第四军医大学西京医院耳鼻咽喉科,西安710032,第四军医大学生化教研室,西安710032,第四军医大学西京医院耳鼻咽喉科,西安710032,第四军医大学西京医院耳鼻咽喉科,西安710032,第四军医
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目的观察反义血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因转染对喉癌生长的影响.
方法克隆人VEGF基因,将VEGF-互补DNA(complementary DNA,cDNA)反向克隆到真核表达载体pcDNA3,构建反义(以负号表示)VEGF表达载体pcDNA3-VEGF(-);利用阳离子脂质体作为载体,转染人喉癌Hep-2细胞;将转染细胞注入裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况;将质粒pcDNA3-VEGF(-)和脂质体混合物直接注入荷瘤(Hep-2)裸鼠体内,观察肿瘤生长情况,通过逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR),观察肿瘤组织中VEGF mRNA的表达情况,并在透射电镜下观察荷瘤肿瘤超微结构的改变.
结果成功克隆了人VEGF基因,并构建了携带反义VEGF基因的真核表达载体pcDNA3-VEGF(-) ;将其稳定转染人Hep-2细胞,获得了稳定表达反义VEGF的细胞系;将转染细胞注入裸鼠皮下,与对照组相比,肿瘤的生长速度明显减缓;将pcDNA3-VEGF(-)与脂质体混合物分次注入荷瘤裸鼠体内,肿瘤的生长较对照组明显减缓;在透射电镜下,见荷瘤肿瘤内出现大量凋亡细胞,肿瘤组织内毛细血管管壁变薄、不规则;反义VEGF质粒治疗组肿瘤组织中VEGF mRNA表达显著低于对照组.
结论反义VEGF基因转染可以有效地抑制喉癌细胞的生长.
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