FANCJ在HEK293T细胞中的表达、纯化及活性检测

来源 :重庆医学 | 被引量 : 0次 | 上传用户：jackyz

【摘要】

：

目的构建包含FANCJ野生型(wt)及其突变体N196S蛋白的真核表达载体,并对纯化的野生型蛋白及突变体蛋白进行活性检测。方法从HEK293T中提取RNA,并反转录为cDNA,使用带有3xFlag

【作者】

：

袁濮玉撖荣杜佳慧储小玲吴洁杨凡苏倩邱桥成薛胜

【机构】

：

苏州卫生职业技术学院苏州检验医学生物技术重点实验室,苏州大学附属第一医院血液科

【出处】

：

重庆医学

【发表日期】

：

2018年36期

【关键词】

：

FANCJ 突变体蛋白纯化活性检测 FANCJ mutant protein purification activity detection

【基金项目】

：

国家自然科学基金资助项目(81470296,31701198),江苏省自然科学基金项目(BK20170386),江苏省“科教强卫工程”青年医学人才项目(QNRC2016719,QNRC2016771),江苏省卫生计生委医学科研课题面上项目(H2017074),江苏省六大人才高峰(2016-WSN-123),江苏省教育厅大学生实践创新训练项目(201712688007Y)

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目的构建包含FANCJ野生型(wt)及其突变体N196S蛋白的真核表达载体,并对纯化的野生型蛋白及突变体蛋白进行活性检测。方法从HEK293T中提取RNA,并反转录为cDNA,使用带有3xFlag标签序列的特异性引物通过PCR方法扩增出人FANCJ编码区全长,并克隆到plvx-EF1-MCS-PGK-PURO载体上;突变体N196S利用NEBaseChanger TM引物设计工具,并利用NEB公司的点突变构建试剂盒Q5 Site-Directed Mutagenesis Kit技术进行操作。重组的FANC

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