目的 探讨低渗非离子型造影剂碘必乐诱导体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)凋亡的作用及机制.方法 体外培养的HK-2细胞,分为阴性对照组、不同剂量(1.16、4.63、18.5、74、296 gl/L)的碘必乐作用组(作用时间为6 h).通过流式细胞仪、Hoechst 33258染色观察细胞凋亡的比例和形态学变化;Western印迹方法检测凋亡蛋白天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达水平,并选取作用最强的剂量(296 gl/L)刺激2、4、6、12 h,观察caspase-3表达变化.选取不同剂量碘必乐作用1 h,与阴性对照组比较,观察细胞外信号调节激酶(ERK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路磷酸化水平的变化,并观察不同剂昔p38MAPK抑制剂SB203580对碘必乐诱导的cagpase-3和Bcl-2表达的影响.结果 流式细胞仪检测结果示74、296 gl/L碘必乐作用下细胞凋亡率较阴性对照显著升高(均P＜0.05).Hoechst 33258染色结果示296 gl/L碘必乐可致明显的细胞凋亡形态学改变,凋亡细胞核呈致密浓染或核碎裂.Western印迹检测方法表明,碘必乐以剂量和时间依赖方式诱导细胞内caspase-3表达,以296 gl/L作用12 h表达最强;各剂量碘必乐作用下细胞内ERK1/2磷酸化水平与阴性对照组的差异均无统计学意义(均P＞0.05),而一定剂镀的碘必乐处理组细胞内p38MAPK磷酸化水平较阴性对照组显著升高(均P＜0.05).应用p38MAPK特异性抑制剂(30 μmol/L)预处理2 h可以阻断细胞内p38MAPK信号通路的磷酸化,抑制碘必乐诱导的细胞内caspase-3表达并部分上调Bcl-2表达,与碘必乐阳性对照组的差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 低渗非离子型造影剂碘必乐以剂量和时间依赖方式诱导体外培养的HK-2细胞凋亡,其机制可能与上调caspase-3和下调抗凋亡蛋白Bcl-2有关,而p38MAPK信号通路的激活可能参与了该过程的调控。
低渗非离子造影剂对肾小管上皮细胞凋亡的作用及其机制
【摘 要】
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目的 探讨低渗非离子型造影剂碘必乐诱导体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)凋亡的作用及机制.方法 体外培养的HK-2细胞,分为阴性对照组、不同剂量(1.16、4.63、18.5、74、296 gl/L)的碘必乐作用组(作用时间为6 h).通过流式细胞仪、Hoechst 33258染色观察细胞凋亡的比例和形态学变化;Western印迹方法检测凋亡蛋白天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3
【机 构】
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200052,上海,解放军第四五五医院肾脏科,南京军区肾脏病专科中心,200052,上海,解放军第四五五医院肾脏科,南京军区肾脏病专科中心
【出 处】
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中华肾脏病杂志
【发表日期】
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2010年26期
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