目的建立高效液相-质谱联用(LC-MS/MS)测定大鼠全血中伊立替康(CPT-11)及其代谢物7-乙基10-羟基喜树碱(SN-38)浓度的方法。方法采用液液法提取大鼠全血中药物,以地西泮为内标;使用Shim-pack XR-ODS(2.0 mm×100 mm,2.2μm)色谱柱,以5 mmol·L-1甲酸铵缓冲液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,梯度流速恒定为:0.3 mL·min-1,柱温为35℃,进样量10μL,总分析时间为4.2 min。质谱采用电喷雾离子源,以多反应离子监测模式进行定量分析。结果伊立替康及其代谢物7-乙基10-羟基喜树碱线性范围分别为1~2 000和0.5~100 ng·mL-1;全血中伊立替康及7-乙基10-羟基喜树碱的LLOQ分别为1和0.5 ng·mL-1。伊立替康和7-乙基10-羟基喜树碱质控样品的批内RSD小于9.43%和11.39%,批间RSD小于9.73%和11.79%,提取回收率分别在73.7%~117.4%和61.7%~75.5%内。结论本方法灵敏度高,准确,干扰少,可应用于大鼠全血中伊立替康及其代谢物7-乙基10-羟基喜树碱浓度的测定和药动学研究。