一种改进的烟草多酚氧化酶Ⅱ纯化方法

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目的:选择不同的分离、纯化步骤并比对分析,筛选出纯化烟草中多酚氧化酶(PPO)的优化组合方案.方法:采用分段盐析、DEAE-Sepharose Fastflow和Sephadex G-150柱层析纯化PPO,通过测定和比较酶活性筛选最佳条件.结果:确定了最佳盐析浓度(40%)和柱层析条件,SDS-PAGE、FPLC以及动力学常数的检测结果表明,纯化出的蛋白质相对分子质量为42 000,Km为1.2 mmol/L,得到了纯化91倍的烟草多酚氧化酶Ⅱ.结论:优化方案减少了有机溶剂分级沉淀、阳离子交换层析等步骤
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