【摘 要】
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目的构建人卵细胞ZP 3蛋白的原核重组载体并进行表达和鉴定。方法提取人卵巢中总RNA,逆转录合成cDNA,自行设计引物,PCR扩增ZP 3蛋白编码序列,PCR产物经B amH I/N heⅠ双酶切
【机 构】
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第二军医大学福州总医院临床医学院,南京军区福州总医院全军医学检验中心
【基金项目】
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全军医药“十五”基金项目(01MA032);福建省重点科技攻关项目(2002Y032)
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目的构建人卵细胞ZP 3蛋白的原核重组载体并进行表达和鉴定。方法提取人卵巢中总RNA,逆转录合成cDNA,自行设计引物,PCR扩增ZP 3蛋白编码序列,PCR产物经B amH I/N heⅠ双酶切后,克隆至表达载体pET-H is中,在E.co li BL 21-DE 3中诱导ZP 3融合蛋白的表达。结果在异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下,重组菌高效表达出一个相对分子质量约为50 000的产物。结论人卵细胞ZP 3蛋白的全长编码序列已被克隆至ZP 3蛋白融合表达载体pET-H is,并在E.co li BL 21-DE 3中获得高表达。
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