【摘 要】
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构建禽白血病病毒(ALV)衣壳蛋白p15基因慢病毒表达载体,并检测其在鸡肝癌细胞系(LMH)中的表达情况,以探讨p15基因对病毒复制、免疫信号通路的影响.以真核表达质粒pCAGGS-p15
【机 构】
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扬州大学教育部禽类预防医学重点实验室,江苏扬州225009;扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室,江苏扬州225009;扬州大学教育部禽类预防医学重点实验室,江苏扬州225009;扬州大学江苏省动物预
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构建禽白血病病毒(ALV)衣壳蛋白p15基因慢病毒表达载体,并检测其在鸡肝癌细胞系(LMH)中的表达情况,以探讨p15基因对病毒复制、免疫信号通路的影响.以真核表达质粒pCAGGS-p15为模板扩增p15全长基因,经双酶切后克隆到慢病毒载体plvx-IRES-ZsGreen1上,构建成plvx-p15-Flag慢病毒表达质粒,将该质粒与辅助质粒共转染293T细胞产生慢病毒,将细胞上清中的病毒感染LMH细胞,检测p15蛋白表达情况.慢病毒载体在293T细胞上包装完成后,病毒滴度为2.25×105 TU/mL.慢病毒感染LMH细胞,基因和蛋白水平检测结果表明,p15蛋白表达良好.表达ALV p15基因的慢病毒包装成功,并且能够感染鸡源LMH细胞.该载体的构建为进一步研究p15蛋白的生物学功能提供工具.
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