【摘 要】
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目的 观察多房棘球蚴感染后巨噬细胞线粒体代谢功能变化,为探索多房棘球蚴病发病机制提供依据.方法 根据处理方法不同设培养组和对照组,其中培养组按照500:1比例将小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)与2000个多房棘球蚴共培养,对照组RAW264.7细胞不做任何处理.根据培养时间不同,将对照组和培养组分为24 h对照组、72 h对照组、24 h培养组、72 h培养组.采用MitoTracker(R) Deep Red FM线粒体深红色荧光探针标记线粒体并应用Cytation5细胞成像微孔板检测系统
【机 构】
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青海大学研究生院 西宁810001;青海大学附属医院儿科;青海大学附属医院中心实验室;青海大学附属医院中心实验室;青海大学研究生院 西宁810001;青海大学附属医院中心实验室;青海大学附属医院儿科;
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目的 观察多房棘球蚴感染后巨噬细胞线粒体代谢功能变化,为探索多房棘球蚴病发病机制提供依据.方法 根据处理方法不同设培养组和对照组,其中培养组按照500:1比例将小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)与2000个多房棘球蚴共培养,对照组RAW264.7细胞不做任何处理.根据培养时间不同,将对照组和培养组分为24 h对照组、72 h对照组、24 h培养组、72 h培养组.采用MitoTracker(R) Deep Red FM线粒体深红色荧光探针标记线粒体并应用Cytation5细胞成像微孔板检测系统检测细胞线粒体平均荧光强度,用实时荧光定量PCR检测线粒体DNA拷贝数(mitochondrial DNA copy number,mtDNA-CN),采用Seahorse细胞能量代谢系统实时监测线粒体能量代谢功能,采用流式细胞术检测线粒体活性氧及线粒体膜电位.结果 24 h(15341±2532 vs.17823±3429;t=6.379,P＜ 0.01)、72 h(18102±3505 vs.21511±5144;t=17.680,P＜ 0.01)培养组线粒体平均荧光强度均较其相应对照组显著降低.72 h培养组mtDNA-CN(3.23×109± 1.78×107)较其对照组(4.39×109± 3.70 × 107)显著降低(t=8.85,P＜0.001).实时线粒体能量代谢功能分析结果示,24 h [(241.70±73.13) pmol/min vs.(69.05±52.30) pmol/min;t=7.89,P＜ 0.01)]、48 h [(249.50±42.06) pmol/min vs.(60.28±40.66) pmol/min;t=8.64,P＜ 0.01]培养组较相应对照组细胞耗氧率升高,且48 h培养组细胞外酸化率较其对照组增高[(111.60±17.49) mpH/min vs.(35.05±7.57) mpH/min;t=16.90,P＜ 0.01];72 h培养组较其对照组线粒体活性氧平均荧光强度显著升高(58264±10087 vs.4307±97;t=12.930,P＜0.01)、线粒体膜电位显著降低(9.833％±2.285％ vs.2.667％±0.208％;t=6.645,P＜0.01).结论 多房棘球蚴感染可损伤巨噬细胞线粒体功能、抑制巨噬细胞氧化磷酸化过程而使糖酵解增强,巨噬细胞代谢状态改变可能是多房棘球蚴病发生和发展的机制之一.
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