【摘 要】
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以陆地棉徐州142为材料,比较了3种不同棉花纤维蛋白质提取方法;利用双向电泳技术比较棉花纤维伸长及初生壁形成期(10DPA)和次生壁增厚期(25DPA)蛋白质组的变化;利用PDQuest软
【机 构】
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新疆农业科学院核技术生物技术研究所
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863)项目(2006AA10Z184);农业部转基因重大专项课题(2009ZX08005-011B);国家自然科学基金项目(30660088);新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目(200611101)资助
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以陆地棉徐州142为材料,比较了3种不同棉花纤维蛋白质提取方法;利用双向电泳技术比较棉花纤维伸长及初生壁形成期(10DPA)和次生壁增厚期(25DPA)蛋白质组的变化;利用PDQuest软件分析各个差异蛋白在10DPA和25DPA棉花纤维中的相对表达量,选取质量好、实验重复性高的蛋白质点15个进行MALDI-TOFMS鉴定;根据目的蛋白核苷酸序列设计特异引物,对5种差异蛋白进行半定量RT-PCR分析。结果表明,利用饱和酚-甲醇醋酸铵法提取的棉花纤维蛋白,其蛋白含量较高,且SDS-PAGE电泳条带清晰;进行MALDI-TOFMS鉴定的15个差异蛋白,于NCBI上进行数据查询,分别属于F-box家族蛋白、肌动蛋白、β-微管蛋白、F1-ATP合成酶、ATP酶β亚基、膜联蛋白、磷酸甘油酸酯激酶I、胞质苹果酸脱氢酶、S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶、谷氨酰胺合成酶、Cu-Zn超氧化物歧化酶、profilin、4-香豆酸辅酶A连接酶等。查询结果表明,上述蛋白参与能量代谢、碳代谢、细胞周期调控和发育等。
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