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【摘 要】目的：探讨抑癌基因PTEN和表皮生长因子VEGF-C在宫颈鳞状细胞癌（SCC）及宫颈上皮内瘤变（CIN）中的表达，探讨二者在宫颈病变中的意义。方法：选取100例石蜡包埋宫颈病变组织，其中30例SCC组织，CINI、 CINII.、CINIII级组织分别为25、15、10，慢性宫颈炎组织20例作为对照组，应用免疫组化方法检测PTEN和VEGF-C在上述组织中的表达，分析二者表达差异的意义。结果：PTEN在慢性宫颈炎、CINI、CINII.、CINIII、浸润性宫颈鳞癌组织中，阳性表达率分别为100.00%、92.03%、73.31%、40.02%、36.66%，表达率逐渐下降，差别有统计意义（P<0.05）。PTEN表达与宫颈鳞癌病理分期有关（P<0.05）。VEGF-C在SCC中阳性表达最强，在CIN和宫颈炎组织内依次降低，且其差异具有统计学意义（P<0.05）；SCC及CIN中PTEN和VEGF-C的阳性表达呈负相关（r=-0.388，P<0.01）。结论：抑癌基因PTEN在宫颈鳞癌组织中的表达异常与宫颈鳞癌的发生及临床分期相关。在CIN及SCC中存在PTEN减少或缺失及VEGF-C表达的上调与宫颈癌的发生、发展有关。
【关键词】抑癌基因PTEN；VEGF-C；宫颈癌；免疫组化
【中图分类号】R737.33 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）03-0048-01
宫颈癌是最常见的妇科恶性肿癌，近年来其发病人群出现稳定上升和年轻化趋势。宫颈癌有较为漫长的癌前病变阶段，从而为它的早期诊断与治疗提供了条件。研究认为，多基因突变可能是宫颈鳞癌发生的机制之一，而这种多基因的突变主要发生在原癌基因、抑癌基因及DNA错配修复基因上。张力蛋白同源的第10染色体同源丢失的磷酸酶基因（PTEN）。[1]PTEN基因既有蛋白酪氨酸磷酸酶活性，又有双重特异性磷酸酶活性，不仅能诱异促进细胞凋亡及抑制细胞有丝分裂，参与细胞周期的调控、抑制生长，而且作用于调节细胞的黏附、转移和分化等。
肿瘤的生长、浸润和转移依赖于血管形成，血管内皮生长因子（VEGF）是一种多功能的细胞因子，可以诱导血管生成，致使肿瘤的生长、侵袭和远处转移。本实验拟就宫颈癌演进过程中PTEN和VEGF-C的变化及两者相互关系进行初步探讨。
1 资料与方法
1.1 研究对象：选取2005年1月—2010年12月在佳木斯大学附属第一医院病理科保存的石蜡包埋宫颈病变组织选取100例，其中30例SCC组织，CINI、 CINII.、CINIII级组织分别为25、15、10，慢性宫颈炎组织20例，患者年龄29-65岁，平均年龄47.5岁，所有病例术前均未接受放、化疗及免疫治疗等其他抗癌治疗，且不合并其他严重内科疾病或恶性肿瘤。所有组织标本均由两名病理医师诊断，宫颈癌的临床分期依据国际妇产科联盟（FIGO，2000年）的临床分期。
1.2 实验方法：兔抗人VEGF-C多克隆抗体购自迈新公司；鼠抗人PTEN单克隆抗体、通用型PV-6000二步法免疫组化检测试剂盒和DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，应用二步法免疫组化方法，按说明书操作。
1.3 免疫组化结果判定 VEGF阳性细胞数<10%为0分，11%～30%为1分，31%～60%为2分，>60%为3分；0分为阴性（-），1～2分为弱阳性（+），3～4分为阳性（+ +），6分以上为强阳性（+ + +）。PTEN阳性染色位于细胞核，呈淡黄色至棕黄色颗粒，根据染色强度及阳性细胞数量将阳性表达分为3级：①弱阳性（+）：阳性细胞比例<10%或显色强度为淡黄色；②强阳性（+++）：阳性细胞比例>60%，多数细胞呈棕黄色；③中度阳性（+ +）：阳性细胞比例及显色强度介于弱阳性与中阳性之间。阴性（-）：即染色强度与背景无明显差别。
1.4统计学处理 采用SPSS 1.0统计软件，各组间率的比较采用χ?检验，P<0.05为有统计学意义；相关分析采用Sperman秩相关分析法。
2 结果
2.1 VEGF-C在宫颈组织中的表达 VEGF-C阳性表达为棕黄色颗粒，表达于肿瘤细胞的胞质中，细胞膜也有表达。VEGF-C在正常宫颈、CIN和SCC组织中的表达依次升高，阳性率分别自24.80%升高至64.36%；VEGF-C在癌组织中的表达与正常组织比较有统计学意义（P<0.05）
2.2 PTEN在慢性宫颈炎、CINI、 CINII.、CINIII、浸润性宫颈鳞癌组织中表达 在上述组织中，PTEN阳性表达率分别为100.00%、92.03%、73.31%、40.02%、36.66%，PTEN的表达率逐渐下降，差别有统计意义（P<0.05）。CINI、 CINII、浸润性宫颈鳞癌组分别和慢性宫颈炎组比较，差别有统计意义（P<0.05）。CINIII、浸润性宫颈鳞癌组分别与CINI组比较，差别有统计意义（P<0.01）。CINII组与浸润性宫颈鳞癌组比较，差别有统计意义（P<0.05）。CINIII组与浸润性宫颈鳞癌组比较，差别无统计学意义（P>0.05）。
2.3 PTEN和VEGF-C表达的关系 PTEN随着肿瘤临床分期的提高表达降低，VEGF-C的表达与之相反，随临床分期的提高表达增强，两者呈负相关（r=-0.375，P<0.01）
3 讨论
目前，宫颈癌的发生率在不断增加，且年轻化的趋势明显，而宫颈癌的发生及发展与机体内癌基因及抑癌基因的异常表达有着重要的关系，1997年，LI[2-3]等用不同方法先后在染色体10q23位点克隆到新的基因，被命名为PTEN，并证明PTEN是一种双特异磷酸脂酶（DSP），且具有底物的高度特异性，其第一个生理性底物为三磷酸脂酰肌醇（PIP），是控制细胞生长的重要第二信使，PTEN通过调控PIP3/PKB（蛋白激酶B）信号传导通路，从而诱导细胞凋亡及抑制细胞生长；PTEN还通过调控黏附激酶（FAK）的活性来抑制细胞的迁移、铺展和局部黏附，抑癌基因PTEN是正常的细胞基因，能够维持细胞正常生长、诱导细胞发生凋亡，在细胞的生、增殖、浸润、迁移及抑制肿癌血管等方面发挥重要作用，与人类多种肿癌的发生发展相关。在人体多种正常组织中可检测出PTEN mRNA表达，且心、脑、肺、肾、胎盘、肝等组织中表达水平较高。目前已发现在许多肿癌如恶性胶质癌、前列腺癌、乳腺癌等中存在PTEN基因的改变[4]。通常抑癌基因PTEN表达于正常组织的细胞中，在正常宫颈组织中的抑癌基因PTEN呈现高表达状态或表达上调[5]。本研究通进对30例宫颈癌患者癌组织中抑癌基因PTEN表达的研究时发现，全部组织标本中均存在抑癌基因PTEN的阳性表达，但呈现低表达状态。当抑癌基因PTEN在组织中的表达下调或缺失时，其对PI3K/AKT通路的抑制作用即减弱或消失，可导致AKT磷酸化，引起下游癌基因Surv iv in的表达上调，随即启动一系列反应，抑制血管内皮细胞和肿癌细胞的凋亡。宫颈鳞状细胞癌是起源于宫颈移行带的恶性肿瘤，在移行带的变化过程中，由于癌基因或抑癌基因的表达失调，如抑癌基因PTEN的表达下调或缺失，促使子宫颈鳞状细胞异常增殖，而凋亡减少，使鳞状细胞凋亡与增殖之间的平衡失调，最终导致子宫颈鳞状细胞的异常增殖而形成子宫颈鳞状细胞癌。CIN是与宫颈浸润癌密切相关的一组癌前病变，它反映宫颈癌发生发展中的连续过程，但并不是所有的CIN均会发展为宫颈癌。如何及早发现对人类威胁较大的CIN是宫颈癌早期预防的关键。
本研究中全部标本均呈现抑癌基因PTEN的阳性表达，但在早期及晚期的癌组织中PTEN蛋白的表达不一致。在早期宫颈癌及晚期宫颈癌组织中的PU值差异有统计学意义（P<0.01），提示随着宫颈病变程度的加重，PTEN蛋白的表达呈现递减的趋势，即宫颈鳞癌的临床分期早PTEN表达率高，而临床分期晚，则PTEN的表达率低。说明抑癌基因PTEN表达的强弱与子宫颈鳞癌的临床分期相关，PTEN基因的表达水平可能有助于宫颈鳞癌分期的判断。
VEGF是一种内皮细胞特异性有丝分裂原，在体外能促进内皮细胞的生长，在体内可诱导血管发生。VEGF是刺激恶性肿瘤血管形成的重要生长因子[6]。在许多肿瘤组织中的VEGF表达增高，并且其水平的高低与肿瘤的某些生物学行为有密切关系[7]。一些原癌基因ras，Her-2等的激活或一些抑癌基因如P53，P16等的失活，均可上调VEGF的表达水平[8]。在本实验中，VEGF在慢性宫颈炎、CIN和SCC组织中的表达依次升高，阳性率分别自24.80%升高至64.36%，与诸多实验结果相吻合。
综上所述，PTEN和VEGF-C与宫颈癌的发生有关，且二者在宫颈病变的发展过程中存在负相关。表明PTEN和VEGF-C有望为宫颈癌及癌前病变的早期诊断与治疗、防止复发、改善预后提供帮助。
参考文献：
[1] 张霞，张友忠，崔保霞，抑癌基因PTEN在宫颈癌组织中的表达及意义[J].济宁医学院学报，2009，32（2）：89-90
[2] 邹三鹏，张薛榜，麻东辉，等VEGF-C在侵润性宫颈癌中的表达及意义[J].基础医学与临床，2007，27（8）：849-852
【关键词】抑癌基因PTEN；VEGF-C；宫颈癌；免疫组化
【中图分类号】R737.33 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）03-0048-01
宫颈癌是最常见的妇科恶性肿癌，近年来其发病人群出现稳定上升和年轻化趋势。宫颈癌有较为漫长的癌前病变阶段，从而为它的早期诊断与治疗提供了条件。研究认为，多基因突变可能是宫颈鳞癌发生的机制之一，而这种多基因的突变主要发生在原癌基因、抑癌基因及DNA错配修复基因上。张力蛋白同源的第10染色体同源丢失的磷酸酶基因（PTEN）。[1]PTEN基因既有蛋白酪氨酸磷酸酶活性，又有双重特异性磷酸酶活性，不仅能诱异促进细胞凋亡及抑制细胞有丝分裂，参与细胞周期的调控、抑制生长，而且作用于调节细胞的黏附、转移和分化等。
肿瘤的生长、浸润和转移依赖于血管形成，血管内皮生长因子（VEGF）是一种多功能的细胞因子，可以诱导血管生成，致使肿瘤的生长、侵袭和远处转移。本实验拟就宫颈癌演进过程中PTEN和VEGF-C的变化及两者相互关系进行初步探讨。
1 资料与方法
1.1 研究对象：选取2005年1月—2010年12月在佳木斯大学附属第一医院病理科保存的石蜡包埋宫颈病变组织选取100例，其中30例SCC组织，CINI、 CINII.、CINIII级组织分别为25、15、10，慢性宫颈炎组织20例，患者年龄29-65岁，平均年龄47.5岁，所有病例术前均未接受放、化疗及免疫治疗等其他抗癌治疗，且不合并其他严重内科疾病或恶性肿瘤。所有组织标本均由两名病理医师诊断，宫颈癌的临床分期依据国际妇产科联盟（FIGO，2000年）的临床分期。
1.2 实验方法：兔抗人VEGF-C多克隆抗体购自迈新公司；鼠抗人PTEN单克隆抗体、通用型PV-6000二步法免疫组化检测试剂盒和DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，应用二步法免疫组化方法，按说明书操作。
1.3 免疫组化结果判定 VEGF阳性细胞数<10%为0分，11%～30%为1分，31%～60%为2分，>60%为3分；0分为阴性（-），1～2分为弱阳性（+），3～4分为阳性（+ +），6分以上为强阳性（+ + +）。PTEN阳性染色位于细胞核，呈淡黄色至棕黄色颗粒，根据染色强度及阳性细胞数量将阳性表达分为3级：①弱阳性（+）：阳性细胞比例<10%或显色强度为淡黄色；②强阳性（+++）：阳性细胞比例>60%，多数细胞呈棕黄色；③中度阳性（+ +）：阳性细胞比例及显色强度介于弱阳性与中阳性之间。阴性（-）：即染色强度与背景无明显差别。
1.4统计学处理 采用SPSS 1.0统计软件，各组间率的比较采用χ?检验，P<0.05为有统计学意义；相关分析采用Sperman秩相关分析法。
2 结果
2.1 VEGF-C在宫颈组织中的表达 VEGF-C阳性表达为棕黄色颗粒，表达于肿瘤细胞的胞质中，细胞膜也有表达。VEGF-C在正常宫颈、CIN和SCC组织中的表达依次升高，阳性率分别自24.80%升高至64.36%；VEGF-C在癌组织中的表达与正常组织比较有统计学意义（P<0.05）
2.2 PTEN在慢性宫颈炎、CINI、 CINII.、CINIII、浸润性宫颈鳞癌组织中表达 在上述组织中，PTEN阳性表达率分别为100.00%、92.03%、73.31%、40.02%、36.66%，PTEN的表达率逐渐下降，差别有统计意义（P<0.05）。CINI、 CINII、浸润性宫颈鳞癌组分别和慢性宫颈炎组比较，差别有统计意义（P<0.05）。CINIII、浸润性宫颈鳞癌组分别与CINI组比较，差别有统计意义（P<0.01）。CINII组与浸润性宫颈鳞癌组比较，差别有统计意义（P<0.05）。CINIII组与浸润性宫颈鳞癌组比较，差别无统计学意义（P>0.05）。
2.3 PTEN和VEGF-C表达的关系 PTEN随着肿瘤临床分期的提高表达降低，VEGF-C的表达与之相反，随临床分期的提高表达增强，两者呈负相关（r=-0.375，P<0.01）
3 讨论
目前，宫颈癌的发生率在不断增加，且年轻化的趋势明显，而宫颈癌的发生及发展与机体内癌基因及抑癌基因的异常表达有着重要的关系，1997年，LI[2-3]等用不同方法先后在染色体10q23位点克隆到新的基因，被命名为PTEN，并证明PTEN是一种双特异磷酸脂酶（DSP），且具有底物的高度特异性，其第一个生理性底物为三磷酸脂酰肌醇（PIP），是控制细胞生长的重要第二信使，PTEN通过调控PIP3/PKB（蛋白激酶B）信号传导通路，从而诱导细胞凋亡及抑制细胞生长；PTEN还通过调控黏附激酶（FAK）的活性来抑制细胞的迁移、铺展和局部黏附，抑癌基因PTEN是正常的细胞基因，能够维持细胞正常生长、诱导细胞发生凋亡，在细胞的生、增殖、浸润、迁移及抑制肿癌血管等方面发挥重要作用，与人类多种肿癌的发生发展相关。在人体多种正常组织中可检测出PTEN mRNA表达，且心、脑、肺、肾、胎盘、肝等组织中表达水平较高。目前已发现在许多肿癌如恶性胶质癌、前列腺癌、乳腺癌等中存在PTEN基因的改变[4]。通常抑癌基因PTEN表达于正常组织的细胞中，在正常宫颈组织中的抑癌基因PTEN呈现高表达状态或表达上调[5]。本研究通进对30例宫颈癌患者癌组织中抑癌基因PTEN表达的研究时发现，全部组织标本中均存在抑癌基因PTEN的阳性表达，但呈现低表达状态。当抑癌基因PTEN在组织中的表达下调或缺失时，其对PI3K/AKT通路的抑制作用即减弱或消失，可导致AKT磷酸化，引起下游癌基因Surv iv in的表达上调，随即启动一系列反应，抑制血管内皮细胞和肿癌细胞的凋亡。宫颈鳞状细胞癌是起源于宫颈移行带的恶性肿瘤，在移行带的变化过程中，由于癌基因或抑癌基因的表达失调，如抑癌基因PTEN的表达下调或缺失，促使子宫颈鳞状细胞异常增殖，而凋亡减少，使鳞状细胞凋亡与增殖之间的平衡失调，最终导致子宫颈鳞状细胞的异常增殖而形成子宫颈鳞状细胞癌。CIN是与宫颈浸润癌密切相关的一组癌前病变，它反映宫颈癌发生发展中的连续过程，但并不是所有的CIN均会发展为宫颈癌。如何及早发现对人类威胁较大的CIN是宫颈癌早期预防的关键。
本研究中全部标本均呈现抑癌基因PTEN的阳性表达，但在早期及晚期的癌组织中PTEN蛋白的表达不一致。在早期宫颈癌及晚期宫颈癌组织中的PU值差异有统计学意义（P<0.01），提示随着宫颈病变程度的加重，PTEN蛋白的表达呈现递减的趋势，即宫颈鳞癌的临床分期早PTEN表达率高，而临床分期晚，则PTEN的表达率低。说明抑癌基因PTEN表达的强弱与子宫颈鳞癌的临床分期相关，PTEN基因的表达水平可能有助于宫颈鳞癌分期的判断。
VEGF是一种内皮细胞特异性有丝分裂原，在体外能促进内皮细胞的生长，在体内可诱导血管发生。VEGF是刺激恶性肿瘤血管形成的重要生长因子[6]。在许多肿瘤组织中的VEGF表达增高，并且其水平的高低与肿瘤的某些生物学行为有密切关系[7]。一些原癌基因ras，Her-2等的激活或一些抑癌基因如P53，P16等的失活，均可上调VEGF的表达水平[8]。在本实验中，VEGF在慢性宫颈炎、CIN和SCC组织中的表达依次升高，阳性率分别自24.80%升高至64.36%，与诸多实验结果相吻合。
综上所述，PTEN和VEGF-C与宫颈癌的发生有关，且二者在宫颈病变的发展过程中存在负相关。表明PTEN和VEGF-C有望为宫颈癌及癌前病变的早期诊断与治疗、防止复发、改善预后提供帮助。
参考文献：
[1] 张霞，张友忠，崔保霞，抑癌基因PTEN在宫颈癌组织中的表达及意义[J].济宁医学院学报，2009，32（2）：89-90
[2] 邹三鹏，张薛榜，麻东辉，等VEGF-C在侵润性宫颈癌中的表达及意义[J].基础医学与临床，2007，27（8）：849-852