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目的 构建结核分枝杆菌抗原ESAT-6的真核表达质粒,并研究其免疫原性.方法采用聚合酶链反应(PCR)方法自结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增esat-6基因片段,定向亚克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-esat-6重组质粒;利用脂质体介导的转染技术,将其导入Vero E6细胞,RT-PCR法检测mRNA表达情况,Western-blot法鉴定表达产物;重组质粒经基因枪免疫小鼠后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠血清抗ESAT-6特异性抗体以及小鼠脾淋巴细胞培养上清液干扰素-γ(IFN-γ)含量.结果成功构建了真核表达重组质粒pVAC-esat-6,并可在VeroE6细胞中表达;重组质粒免疫小鼠3次后,抗体滴度达到了1:1600,重组质粒组(pVAC-esat-6组)小鼠脾淋巴细胞培养上清液IFN-γ水平明显高于对照组(pVAC组)(P＜0.01).结论成功构建结核分枝杆菌抗原ESAT-6的真核表达质粒pVAC-esat-6,免疫小鼠后诱导产生了特异的体液免疫应答和细胞免疫应答。