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[摘 要] 目的 建立红霉素明胶微球中红霉素含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为DIKMA C18色谱柱（5 μm，250 mm×4.6 mm），流动相为0.1 mol/L磷酸二氫铵（三乙胺调节至pH6.5）乙腈（体积比67∶33），流速1 mL/min；检测波长210 nm。结果 红霉素质量浓度在0.099 2～0.496 0 mg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系，r=0.999 9；平均回收率为100.1%，RSD=0.95%（n=9）。结论 本文方法可用于红霉素明胶微球的含量检测。？
[关键词] 红霉素明胶微球 测定技术
中图分类号：TD823.8 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）10-0248-01
红霉素（erythromycin）是临床上应用广泛的抗生素，是治疗支原体肺炎、军团菌肺炎的首选药物，但在体内分布广泛，有效治疗浓度维持时间短，容易诱发耐药性，且有口服吸收不规则、肝毒性等不良反应。
红霉素微球是以可生物降解的明胶为载体，是本实验室通过正交试验优化制备的具有合适粒径的肺靶向性微球。中国药典（2005年版）中红霉素的含量测定采用微生物检定法，此法操作繁琐、费时、影响因素多、结果准确性差。文献报道红霉素及其在制剂中含量的检测方法有紫外分光光度法、高效液相法、高效毛细管电泳法等。
本文作者曾采用紫外分光光度法测定红霉素微球的含量，取得良好效果。本文采用高效液相色谱法测定红霉素明胶微球含量，并对2种方法进行统计分析，检验2种方法的差异性。
1 仪器与试药
岛津LC10ATVP高效液相色谱仪（SHIMADZU COPRPORATION），紫外SPD10Avp检测器（SHIMADZU COPRPORATION），HW色谱工作站。pHS25pH计（上海精密科学仪器有限公司），超声波清洗器（天津市考德斯科技有限公司）。
红霉素标准品（中国药品生物制品检定所，批号30307200215），乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸水。红霉素明胶微球（简称EMGMS，自制，批号：20060809、20060812、20060815、20060820、20060822、20060828）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱： DIKMA C18柱（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流动相：0.1 mol/L磷酸二氢铵（三乙胺调节pH 6.5）乙腈（体积比67∶33）；流速1 mL/min；检测波长：210 nm。
2.2 溶液的配制
精密称取红霉素标准品49.6 mg置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为0.992 mg/mL的标准品溶液。
精密称取红霉素明胶微球172.3 mg（约相当于红霉素23 mg），充分研磨，显微观察微球完全破坏后，置于容量瓶中加流动相至刻度，超声30 min，放冷，用流动相定容至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，制成供试品溶液。
精密称取空白明胶微球172.4 mg，充分研磨，按“供试品溶液”制备方法制成阴性对照溶液。
2.3 系统适应性及方法专属性试验
在选定的色谱条件下，分别注入红霉素标准品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，红霉素拖尾因子为1.26、保留时间约13.1 min，理论塔板数按红霉素计算不低于1 000，与其他组分可基线分离，阴性样品不干扰样品测定。
2.4 标准曲线
分别精密量取标准品溶液1、2、3、4、5 mL置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别取20 μL进样，记录色谱峰峰面积。以峰面积（A）为横坐标，质量浓度（ρ）为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：ρ=0.3×10-4A+0.28×10-2，r=0.999 9。结果表明红霉素的质量浓度在0.099 2～0.496 0 mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 稳定性试验
取供试品溶液在室温放置，分别于0、2、4、6、8、10 h进样，记录色谱峰峰面积，RSD为0.86%，表明样品溶液在10 h内稳定。
2.6 精密度试验
取对照品溶液，于10 h内不同时间重复进样5次，记录色谱峰峰面积，RSD为1.41%，表明精密度良好。
2.7 回收率试验
精密吸取已知浓度的红霉素明胶微球溶液9份，加入一定量的红霉素对照品，配制成高、中、低3种质量浓度的溶液，按“2.2”项方法制成供试液，进样测定，计算回收率，结果平均回收率为100.1%，RSD值为0.95%（n=9）。
2.8 重复性试验
取同一批微球（批号：20060809）5份，按“2.2”项方法制成供试液，进样，记录色谱图，计算红霉素含量的RSD为1.2%，表明重复性良好。
2.9 样品的测定
取6批样品，按“2.2”项方法制成供试液，进样测定。并同时按紫外分光光度法进行检测，采用统计软件SAS9.0对2种方法的测定结果进行配对资料两样本均数t检验， 2种方法的测定结果差异无显著性（P=0.85，P>0.05）。
参考文献
[1]伍善广 杨帆 潘育方 黄慧 李桃？，HPLC法测定红霉素明胶微球的含量，2013.05
[2] 陈新谦.新编药物学[M].14版.北京：人民卫生出版社，1997：78-79.
[3] ILLUM L， DAVID S S.Targeting of colloidal particles to the bone marrow[J].Life Sci，1987，40：1553-1560.
[4]伍善广，潘育方，杨帆，等.紫外分光光度法测定红霉素明胶微球的含量[J].海峡药学，2007，19（10）：65-66. 3.
[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典：2005年版二部[S].北京：化学工业出版社，2005：22
[6]孔小轶，车宝泉，田红昭.高效毛细管电泳法测定红霉素的含量[J].首都都医药，1999，6（7）：18.
[7]朱恩东，茅春新.HPLC法测定红霉素含量[J].中国医学研究与临床，2004，16（2）：39-40.
[关键词] 红霉素明胶微球 测定技术
中图分类号：TD823.8 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）10-0248-01
红霉素（erythromycin）是临床上应用广泛的抗生素，是治疗支原体肺炎、军团菌肺炎的首选药物，但在体内分布广泛，有效治疗浓度维持时间短，容易诱发耐药性，且有口服吸收不规则、肝毒性等不良反应。
红霉素微球是以可生物降解的明胶为载体，是本实验室通过正交试验优化制备的具有合适粒径的肺靶向性微球。中国药典（2005年版）中红霉素的含量测定采用微生物检定法，此法操作繁琐、费时、影响因素多、结果准确性差。文献报道红霉素及其在制剂中含量的检测方法有紫外分光光度法、高效液相法、高效毛细管电泳法等。
本文作者曾采用紫外分光光度法测定红霉素微球的含量，取得良好效果。本文采用高效液相色谱法测定红霉素明胶微球含量，并对2种方法进行统计分析，检验2种方法的差异性。
1 仪器与试药
岛津LC10ATVP高效液相色谱仪（SHIMADZU COPRPORATION），紫外SPD10Avp检测器（SHIMADZU COPRPORATION），HW色谱工作站。pHS25pH计（上海精密科学仪器有限公司），超声波清洗器（天津市考德斯科技有限公司）。
红霉素标准品（中国药品生物制品检定所，批号30307200215），乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸水。红霉素明胶微球（简称EMGMS，自制，批号：20060809、20060812、20060815、20060820、20060822、20060828）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱： DIKMA C18柱（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流动相：0.1 mol/L磷酸二氢铵（三乙胺调节pH 6.5）乙腈（体积比67∶33）；流速1 mL/min；检测波长：210 nm。
2.2 溶液的配制
精密称取红霉素标准品49.6 mg置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为0.992 mg/mL的标准品溶液。
精密称取红霉素明胶微球172.3 mg（约相当于红霉素23 mg），充分研磨，显微观察微球完全破坏后，置于容量瓶中加流动相至刻度，超声30 min，放冷，用流动相定容至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，制成供试品溶液。
精密称取空白明胶微球172.4 mg，充分研磨，按“供试品溶液”制备方法制成阴性对照溶液。
2.3 系统适应性及方法专属性试验
在选定的色谱条件下，分别注入红霉素标准品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，红霉素拖尾因子为1.26、保留时间约13.1 min，理论塔板数按红霉素计算不低于1 000，与其他组分可基线分离，阴性样品不干扰样品测定。
2.4 标准曲线
分别精密量取标准品溶液1、2、3、4、5 mL置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。分别取20 μL进样，记录色谱峰峰面积。以峰面积（A）为横坐标，质量浓度（ρ）为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：ρ=0.3×10-4A+0.28×10-2，r=0.999 9。结果表明红霉素的质量浓度在0.099 2～0.496 0 mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 稳定性试验
取供试品溶液在室温放置，分别于0、2、4、6、8、10 h进样，记录色谱峰峰面积，RSD为0.86%，表明样品溶液在10 h内稳定。
2.6 精密度试验
取对照品溶液，于10 h内不同时间重复进样5次，记录色谱峰峰面积，RSD为1.41%，表明精密度良好。
2.7 回收率试验
精密吸取已知浓度的红霉素明胶微球溶液9份，加入一定量的红霉素对照品，配制成高、中、低3种质量浓度的溶液，按“2.2”项方法制成供试液，进样测定，计算回收率，结果平均回收率为100.1%，RSD值为0.95%（n=9）。
2.8 重复性试验
取同一批微球（批号：20060809）5份，按“2.2”项方法制成供试液，进样，记录色谱图，计算红霉素含量的RSD为1.2%，表明重复性良好。
2.9 样品的测定
取6批样品，按“2.2”项方法制成供试液，进样测定。并同时按紫外分光光度法进行检测，采用统计软件SAS9.0对2种方法的测定结果进行配对资料两样本均数t检验， 2种方法的测定结果差异无显著性（P=0.85，P>0.05）。
参考文献
[1]伍善广 杨帆 潘育方 黄慧 李桃？，HPLC法测定红霉素明胶微球的含量，2013.05
[2] 陈新谦.新编药物学[M].14版.北京：人民卫生出版社，1997：78-79.
[3] ILLUM L， DAVID S S.Targeting of colloidal particles to the bone marrow[J].Life Sci，1987，40：1553-1560.
[4]伍善广，潘育方，杨帆，等.紫外分光光度法测定红霉素明胶微球的含量[J].海峡药学，2007，19（10）：65-66. 3.
[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典：2005年版二部[S].北京：化学工业出版社，2005：22
[6]孔小轶，车宝泉，田红昭.高效毛细管电泳法测定红霉素的含量[J].首都都医药，1999，6（7）：18.
[7]朱恩东，茅春新.HPLC法测定红霉素含量[J].中国医学研究与临床，2004，16（2）：39-40.