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目的
观察微小RNA(miRNA,miR)-339-5p通过鼠双微体基因(MDM2)对乳腺癌MCF-7细胞p53肿瘤抑制通路调节的效果。
方法建立高通量筛选方法,将hsa-miR-339-5p前体miRNA、hsa-miR-192-5p前体miRNA、hsa-miR-605前体miRNA、小干扰RNA(siRNA) p53和siRNA MDM2转染至MCF-7、HEK293、ACNH和BJ-人端粒酶反转录酶(hTERT)细胞中,5-氟尿嘧啶(5-Fu)水溶液或雷公藤甲素处理转染细胞,Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测MDM2表达。
结果转染miR-339-5p后,MCF-7和HCT116细胞系中p53蛋白水平分别升高2.60倍及2.48倍;在无遗传毒性应激情况下,MDM2蛋白水平显著降低。5-Fu处理后,p53蛋白及目标MDM2和p21水平均上调。miR-339-5p与siRNA MDM2可降低MDM2 mRNA水平。MCF-7细胞株中,与对照组比较,MDM2 mRNA水平均由于转染siRNA MDM2或miR-339-5p而分别降低至0.48±0.15和0.47±0.08。雷公藤甲素处理后,MDM2 mRNA水平下降更加明显,分别为0.19±0.05和0.23±0.10。p53敲除试验则表明miR-339前体水平升高不依赖于p53。MDM2基因3'端非编码区域(3'-UTR)包含有能与miR-339-5p结合的功能位点,正是这些位点的存在介导了转录本抑制。
结论miR-339-5p通过靶向MDM2调节乳腺癌MCF-7细胞p53肿瘤抑制通路。