脂多糖诱导对内皮细胞释放内皮细胞微粒的影响

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目的探讨脂多糖刺激对内皮细胞释放内皮细胞微粒(EMP)的影响。方法取人脐静脉内皮细胞培养,分为正常对照组(无脂多糖诱导)和不同浓度脂多糖(浓度分别为0.1、1.0、10.0、20.0μg/m L)组,脂多糖诱导24 h后收集细胞培养液并消化内皮细胞制成细胞悬液。离心法提取细胞培养液内的EMP,加入特异性荧光抗体(anti-CD31-CFS、anti-CD51-PE、anti-CD54-FITC、antiCD144-PE、anti-CD62E-APC)。采用流式细胞仪检测脂多糖诱导内皮细胞释放荧光标记EMP的变化以及内皮细胞的凋亡率。对数据行方差分析、t检验、Dunnett-t检验。结果对照组和0.1、1.0、10.0、20.0μg/m L脂多糖组CD31~+EMP数量水平分别为(1.23±0.43)×10~6、(1.92±0.64)×10~6、(2.55±0.78)×10~6、(3.96±0.78)×10~6、(6.96±1.80)×10~6,组间比较差异有统计学意义(F=5.83,P<0.05),CD31~+EMP占总体EMP的比值分别为(4.57±1.33)%、(5.92±1.24)%、(6.93±1.61)%、(7.44±1.09)%、(13.44±3.39)%,组间比较差异有统计学意义(F=3.43,P<0.05)。与对照组比较,10.0、20.0μg/m L脂多糖组CD31~+EMP数量水平明显升高,差异均有统计学意义(t=-3.06、-3.61,P值均小于0.05);20.0μg/m L脂多糖组CD31~+EMP数量水平高于0.1、1.0μg/m L脂多糖组,差异均有统计学意义(P值均小于0.05)。CD31~+EMP占总体EMP的比值20.0μg/m L脂多糖组高于对照组和0.1μg/m L脂多糖组,差异均有统计学意义(P值均小于0.05)。对照组和0.1、1.0、10.0、20.0μg/m L脂多糖组CD54+EMP数量水平分别为(4.70±1.01)×10~6、(9.20±3.34)×10~6、(8.83±1.70)×10~6、(17.18±3.78)×10~6、(17.73±4.98)×10~6,组间比较差异有统计学意义(F=3.35,P<0.05)。与对照组比较,10.0、20.0μg/m L脂多糖组CD54+EMP数量水平明显升高,差异均有统计学意义(t=-3.19、-3.00,P值均小于0.05)。对照组和0.1、1.0、10.0、20.0μg/m L脂多糖组CD144~+EMP数量水平分别为(3.93±1.22)×10~6、(6.80±1.36)×10~6、(8.03±2.53)×10~6、(17.22±4.52)×10~6、(11.05±5.80)×10~6,组间比较差异有统计学意义(F=3.17,P<0.05)。10.0μg/m L脂多糖组CD144~+EMP数量水平高于对照组及0.1、1.0μg/m L脂多糖组,差异均有统计学意义(P值均小于0.05)。20.0μg/m L脂多糖组CD62E+EMP数量水平为(2.95±0.26)×10~6,明显高于对照组(1.26±0.26)×10~6,差异有统计学意义(t=-4.45,P<0.05)。各组内皮细胞凋亡率比较差异无统计学意义(F=0.17,P>0.05)。结论脂多糖损伤内皮细胞可表现为表达特异性标记的EMP的大量释放,可能是脓毒症内皮细胞损伤机制之一。
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