【摘 要】
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目的:探讨miR-21在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞中的表达及其调控细胞增殖和侵袭的机制.方法:通过Real-time PCR检测HCC细胞株(Hep3B、HuH7、SNU398和Hep3G2)和人正常肝细胞(THLE2、THLE3)中miR-21的表达.使用miR-21-inhibitor及对照miR-NC分别瞬时转染Hep3B和HuH7细胞,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力.双荧光素酶实验检测miR-21与组织金属蛋白酶
【机 构】
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海南医学院第一附属医院消化内科,海南 海口 570102
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目的:探讨miR-21在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞中的表达及其调控细胞增殖和侵袭的机制.方法:通过Real-time PCR检测HCC细胞株(Hep3B、HuH7、SNU398和Hep3G2)和人正常肝细胞(THLE2、THLE3)中miR-21的表达.使用miR-21-inhibitor及对照miR-NC分别瞬时转染Hep3B和HuH7细胞,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力.双荧光素酶实验检测miR-21与组织金属蛋白酶抑制因子3(tissue metalloproteinase inhibitor factor 3,TIMP3)的靶向结合关系;Western blot法检测TIMP3、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)和MMP9的表达.结果:Hep3B、HuH7、SNU398和Hep3G2细胞中miR-21表达均高于THLE2、THLE3细胞,差异有统计学意义(P<0.01).Hep3B和HuH7细胞转染miR-21-inhibitor后细胞侵袭能力受到有效抑制(P<0.01),对细胞增殖没有显著影响.双荧光素酶实验结果显示,miR-21-mimic转染后,野生型质粒组荧光素酶活性显著降低,与miR-NC组相比,差异均有统计学意义(P<0.01);突变质粒组,miR-21-mimic对其荧光素酶活性没有显著影响,与miR-NC组相比,差异也不显著.miR-21-inhibitor转染组Hep3B和HuH7细胞中TIMP3表达均升高,MMP2和MMP9的表达降低,与miR-NC相比,差异具有统计学意义(P<0.01).结论:miR-21能够通过靶向抑制TIMP3表达,进而上调MMP2和MMP9的表达与活化促进HCC细胞侵袭.
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