【摘 要】
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为获得有活性的猪肝羧酸酯酶1(PLE1)并研究其功能,利用RT-PCR与常规PCR方法,从大白猪肝组织中扩增PLE1基因的ORF。将PLE1的ORF序列连接到pET15b原核表达载体,在Origami TM2(D
【机 构】
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华中农业大学动物医学院农业微生物学国家重点实验室,华中农业大学动物医学院农业部兽用诊断制剂创制重点实验室,罗德岛大学生物医学科学系药物基因组学与分子治疗中心
【基金项目】
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国家自然科学基金(31372484),湖北省自然科学基金(2012FFB02906),中央高校基本科研业务费专项资金(2011PY117)
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为获得有活性的猪肝羧酸酯酶1(PLE1)并研究其功能,利用RT-PCR与常规PCR方法,从大白猪肝组织中扩增PLE1基因的ORF。将PLE1的ORF序列连接到pET15b原核表达载体,在Origami TM2(DE3)中与pGro7质粒共诱导表达,纯化目的蛋白质并检测其酶活性。测序结果表明克隆到PLE1基因编码区全长1 686bp的片段,该片段编码562个氨基酸。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,PLE1融合蛋白质成功表达,在30℃的培养温度下,IPTG诱导6h后,PLE1重组蛋
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