【摘 要】
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目的 表达和纯化一种新的来自于超耐热菌（thermococcuskodakarensis）KODl的单链DNA结合蛋白（缩写为kod—ssb），并探讨其对DNA、cDNA合成的影响。方法采用Transrtta（DE3）表达kod-ssb，用镍柱亲和层析纯化，经SDS—PAGE分析检测表达纯化后的kod—ssb。使用PCR及qRT／qPCR检测kod-ssb对DNA、cDNA合成的影响。结果将质粒p
【机 构】
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天津市第五中心医院肝胆外科,300450,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
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目的 表达和纯化一种新的来自于超耐热菌（thermococcuskodakarensis）KODl的单链DNA结合蛋白（缩写为kod—ssb），并探讨其对DNA、cDNA合成的影响。方法采用Transrtta（DE3）表达kod-ssb，用镍柱亲和层析纯化，经SDS—PAGE分析检测表达纯化后的kod—ssb。使用PCR及qRT／qPCR检测kod-ssb对DNA、cDNA合成的影响。结果将质粒pETlla—kod转化Transetta（DE3）中，得到重组菌株Transetta（pETlla—kod），经IPTG诱导。由SDS—PAGE分析可见表达的约40×103的特异条带；使用人类B球蛋白基因作为模板分别扩增5kbp，9kbp和13kbp目的片段，结果加了kod—ssb的PCR目的片段比没加的产量高很多，而且kod—ssb显著降低了PCR反应的非特异性扩增。以流感细胞培养上清抽提的RNA为模板，实施RT-／qPCR反应。结果加kod的平均Ct值是19．42，而没加的为22．15。结论kod-ssb在未来将被用于增强DNA和cDNA的合成。
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