【摘 要】
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目的利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统建立高效分泌表达人类免疫缺陷病毒(HIV)-1 Env gp120糖蛋白的方法，并对其理化性质及免疫原特性进行分析。方法选择B亚型HIV-1 NL4-3 gp120进行蛋白克隆设计，将目的蛋白基因序列克隆到杆状病毒转移载体pAcgp67B中pH启动子的下游，构建成重组转移载体pAc-gp120，利用同源重组的方式在宿主细胞内获得重组杆状病毒，并在High Five
【机 构】
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361102 厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心，生命科学学院,361102 厦门大学国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心，生命科学学院,361102 厦门大学分子疫苗学与分子诊断学
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目的利用杆状病毒-昆虫细胞表达系统建立高效分泌表达人类免疫缺陷病毒(HIV)-1 Env gp120糖蛋白的方法，并对其理化性质及免疫原特性进行分析。
方法选择B亚型HIV-1 NL4-3 gp120进行蛋白克隆设计，将目的蛋白基因序列克隆到杆状病毒转移载体pAcgp67B中pH启动子的下游，构建成重组转移载体pAc-gp120，利用同源重组的方式在宿主细胞内获得重组杆状病毒，并在High Five™昆虫细胞中表达gp120蛋白。之后使用酶联免疫吸附试验、分析超离和分子排阻色谱进行理化性质分析，并通过小鼠免疫实验分析其免疫原性。
结果建立昆虫细胞表达系统制备和纯化重组HIV-1 gp120蛋白的方法，最终获得纯度约90%的gp120蛋白，多批次纯化后鉴定产量约为13 mg/L；酶联免疫吸附测定、分析超离和分子排阻色谱性质分析试验显示，重组HIV gp120蛋白在溶液有良好的抗原性并且在溶液中较为均一；通过弗氏佐剂与目的蛋白混合免疫BALB/c小鼠，免疫血清对NL4-3病毒具有一定程度中和活性，表明gp120蛋白能有效刺激机体产生免疫应答。
结论成功建立了简便、可放大的HIV gp120蛋白表达和纯化方法，获得较为均一的、免疫原性良好的gp120抗原，为进一步开展HIV疫苗研究工作奠定了基础。
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