【摘 要】
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目的克隆日本血吸虫原肌球蛋白编码基因,并在大肠杆菌中表达.方法抽提日本血吸虫(大陆株)成虫总RNA,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得编码日本血吸虫原肌球蛋白的cDNA片段,
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划);
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目的克隆日本血吸虫原肌球蛋白编码基因,并在大肠杆菌中表达.方法抽提日本血吸虫(大陆株)成虫总RNA,经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得编码日本血吸虫原肌球蛋白的cDNA片段,该片段与全序列比较,缺氨基端14个氨基酸.该PCR产物克隆入T 载体并对插入片段进行序列测定后,亚克隆入表达载体pbV220,经琼脂糖凝胶电泳、限制性酶切反应和PCR鉴定后,选择克隆用于温控表达.结果 RT-PCR产物克隆入T载体,序列测定表明,在核苷酸水平和推断和氨基酸水平,与曼氏血吸虫分别有96.5%和98.1的同源性.目的DNA片段亚克隆入原核表达载体pBV220,在大肠杆菌 DH5α中诱导表达.经SDS-PAGE和Western blot分析表明,该非融合表达产物相对分子质量约为32000(32 kDa),日本血吸虫(大陆株)成虫天然原肌球蛋白免疫兔血清能特异识别该重组蛋白.结论编码日本血吸虫原肌球蛋白cDNA克隆及起其在细菌中的表达获得成功.
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