棉蚜不同品系羧酸酯酶的酶标仪动力学测定研究

来源 :中国农业大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:frgverger343
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用分光光度计终点测定法和酶标仪动力学测定法对3个抗性水平不同的棉蚜品系和1个敏感品系的羧酸酯酶进行了研究。以α-乙酸萘酯(α-NA)为底物时,敏感品系(S)和抗性品系R1,R2,R3终点测定法所需的最适酶量分别为1/2,1/20,1/33和1/100头蚜虫,β-乙酸萘酯(β-NA)为底物时分别为1/3,1/20,1/33和1/100头蚜虫。S品系对β-NA的水解活性明显高于α-NA,而抗性品系相反,对α-NA的活性明显高于β-NA。对α-NA水解的活性在不同品系间差异较大(近60倍),而对β-NA水解的活性差异小于对α-NA,最大约为14倍。用酶标仪动力学测定法研究表明,4个棉蚜品系间羧酸酯酶活性具有明显的差异,S,R1,R2和R3分别为38,85,198和762mOD·min-1·虫-1;与4个品系的抗性程度比较,酶动力学方法的测定结果更可靠。 Carboxylesterase activities of three susceptible cotton aphid strains and one susceptible strain were studied by spectrophotometer endpoint assay and microplate reader kinetic assay. When the α-NA was used as the substrate, the optimum amount of enzyme required for the endpoint determination of the susceptible strain (S) and the resistant strains R1, R2, and R3 were respectively 1/2, 1/20, 1/33 and 1/100 aphids, and β-NA was 1/3, 1/20, 1/33 and 1/100 aphids, respectively. S strain hydrolyzed β-NA significantly higher than α-NA, whereas the resistant strain had a higher α-NA activity than β-NA. The activity of α-NA hydrolysis varied greatly among different lines (nearly 60-fold), while the difference in β-NA hydrolysis was less than that of α-NA, up to a maximum of about 14-fold. The kinetic assay of microplate reader showed that the carboxylesterase activity of four cotton aphid strains was significantly different. The values ​​of S, R1, R2 and R3 were 38, 85, 198 and 762 mOD · min- 1; Compared with the resistance of 4 strains, the results of enzyme kinetic method are more reliable.
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