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为探讨自行构建T载体的简便方法，克隆丙型肝炎病毒（HCV）5′端非编码区（5′NCR）扩增产物，并为制备HCV检测探针作准备。以SmaⅠ消化质粒pGEM3Zf（+），酶切产物纯化后在仅含有脱氧腺苷酸的聚合酶链反应（PCR）缓冲液中70C作用2小时，构建成T载体。根据PCR扩增产物3′端存在一个非模板依赖的脱氧腺苷酸原理，将扩增产物直接克隆入T载体。同时以SmaⅠ消化的质粒pGEM3Zf（+）与PCR产物平端连接作为对照。限制性酶切长度多肽性分析，PCR及DNA序列测定等均证实克隆构建成功。AT克隆的连接效率约为平端连接的42倍。以上结果表明，构建T载体经济、简便。AT克隆快速、有效。所构建的克隆可用作PCR实验对照模板或制备探针。