【摘 要】
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目的 探讨脓毒症大鼠肺组织来源的胞外囊泡对脓毒症肺内炎症反应及中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)形成的影响.方法 采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)建立脓毒症大鼠模型,利用Collagenase D和DNase Ⅰ充分酶解消化肺组织,多次离心去除杂质,最后通过差速超速离心法提取肺组织胞外囊泡(Ti-Evs).将18只雄性SD大鼠随机分为3组:Ti-Evs组行CLP术并经气道滴入Ti-Evs混悬液(
【机 构】
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南昌大学第一附属医院重症医学科,南昌330006;南昌大学第一附属医院肿瘤科,南昌330006;南昌大学第一附属医院泌尿外科研究所,南昌330006
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目的 探讨脓毒症大鼠肺组织来源的胞外囊泡对脓毒症肺内炎症反应及中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)形成的影响.方法 采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)建立脓毒症大鼠模型,利用Collagenase D和DNase Ⅰ充分酶解消化肺组织,多次离心去除杂质,最后通过差速超速离心法提取肺组织胞外囊泡(Ti-Evs).将18只雄性SD大鼠随机分为3组:Ti-Evs组行CLP术并经气道滴入Ti-Evs混悬液(2.5 mg/kg);CLP组行CLP术并经气道滴入等体积PBS;Sham组行假手术.24 h后利用苏木精-伊红(HE)染色检测肺组织病理学变化,酶联免疫吸附实验检测肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中IL-1 β、TNF-α及IL-6的表达水平,免疫荧光法检测肺组织内NETs含量.结果 分离提取的大鼠肺组织胞外囊泡经透射电镜观察为双层圆形的囊性小泡结构,粒子直径主要分布在150 nm,Western blot显示Evs标志物CD9、CD63、Tsg101呈阳性表达.肺组织HE染色可见脓毒症大鼠肺泡完整性破坏,炎症细胞浸润.与CLP组相比,Ti-Evs组肺组织损伤程度更重,且BALF中IL-1β、TNF-α、IL-6炎症因子表达水平均显著升高(P＜0.01);激光共聚焦显微镜下见脓毒症组和Ti-Evs组肺内均有NETs形成,Ti-Evs组肺内NETs荧光强度较脓毒症组明显增加.结论 通过酶解消化、差速超速离心等系列步骤能够成功分离提取得到纯度较高的大鼠肺组织胞外囊泡.在脓毒症肺损伤进程中,肺组织胞外囊泡可加重肺内炎症反应,促进NETs形成.
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