【摘 要】
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目的探讨沉默EZH2表达逆转人肺癌顺铂耐药性的作用及机制。方法以实时荧光定量PCR和Western blot法检测人非小细胞肺癌A549及其顺铂耐药株A549/DDP细胞中EZH2的表达;以siRNA
【机 构】
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南方医科大学药学院,广州医科大学附属第二医院药学部,广州市番禺中心医院药学部
【基金项目】
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广东省教育部产学研结合项目(No 2012B091100465);广东省自然科学基金资助项目(No S2012010009368)
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目的探讨沉默EZH2表达逆转人肺癌顺铂耐药性的作用及机制。方法以实时荧光定量PCR和Western blot法检测人非小细胞肺癌A549及其顺铂耐药株A549/DDP细胞中EZH2的表达;以siRNA沉默EZH2的表达,MTT法检测细胞增殖力;流式细胞术检测细胞周期分布与凋亡;β-半乳糖苷酶染色法检测细胞的衰老;Western blot法检测细胞衰老通路P14ARF、P16INK4a、P53、P21、CDK1、CDK2、Rb、E2F1和H3K27me3的表达。结果 A549/DDP细胞的EZH2在mRNA和蛋白质水平上的表达均明显高于A549细胞。沉默EZH2的表达并未引起细胞发生明显的凋亡现象,但G0/G1期比值明显升高(从0.53±0.08升到0.84±0.09,P<0.01),明显增加耐药株对顺铂的敏感性[IC50从(41.2±4.3)μmol·L-1降低到(19.4±3.3)μmol·L-1,P<0.01]。细胞呈衰老特征,细胞衰老通路的P14ARF、P16INK4a、P53、P21、Rb表达上调,CDK1、CDK2、H3K27me3、E2F1表达下调。结论沉默EZH2的表达能诱导A549/DDP细胞衰老,逆转其对顺铂的耐药性,其机制与调节INK4a/ARF/Rb衰老通路有关。
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