【摘 要】
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细菌人工染色体(BAC)文库在基因组研究中起着关键作用.构建BAC文库的一个关键步骤就是BAC载体DNA的制备.制备高质量的BAC载体DNA受到包括酶切、脱磷等诸多因素的影响.以BAC载
【机 构】
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中国农业科学院作物品种资源研究所农业部作物种质资源与生物技术重点开放实验室
【基金项目】
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国家转基因植物研究和产业化专项基金
论文部分内容阅读
细菌人工染色体(BAC)文库在基因组研究中起着关键作用.构建BAC文库的一个关键步骤就是BAC载体DNA的制备.制备高质量的BAC载体DNA受到包括酶切、脱磷等诸多因素的影响.以BAC载体pECBAC1为材料,分别采用限制性内切酶BamHⅠ和HK脱磷酶对其进行酶切和脱磷,并结合凝胶回收纯化技术,制备了可用于进一步构建BAC文库的线性载体DNA.并在此基础上,确定了制备BAC载体DNA的适宜条件,其中包括确定适宜限制内切酶用量及酶切时间,脱磷酶种类及浓度和凝胶回收纯化线性载体DNA等关键步骤.
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