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摘 要：琼脂糖凝胶电泳是生物化学中常用的分离技术之一，在医学基础研究及分析中有广泛的应用。“DNA的琼脂糖凝胶电泳”是生物化学实验必开的基础型实验。在“DNA片段的琼脂糖凝胶电泳”实验教学中，应用一种毒性低的新型核酸染料SYBR-green-I替代溴化乙锭（EB）对琼脂糖凝胶中DNA片段进行染色，在紫外分析仪下观察结果，可见清晰、明亮的绿色荧光条带。改进后的实验操作方便、安全，对环境污染小，取得了良好的教学效果。
关键词：琼脂糖凝胶电泳；实验教学；改进
琼脂糖凝胶电泳是重组DNA研究中常用的技术。可用于分离、鉴定和纯化DNA片段。不同大小、不同形状和不同构象的DNA分子在相同的电泳条件下（如凝胶浓度、电流、电压、缓冲液等），有不同的迁移，所以可通过电泳使其分离。凝胶中的DNA可与荧光染料结合，在紫外灯下看到荧光条带，借此可分析实验结果。我院生化实验室一直用EB染料对DNA片段进行染色，EB染料具有染色效果好、性质稳定、易储存、价格便宜等优点，但其具有中等毒性，是一种强诱变剂，易对操作人员造成危害和对环境造成污染。为减少实验室有毒试剂的排放，本实验采用一种新型核酸染料SYBR-green-I代替EB，通过对教学实验的改进，取得了良好的教学效果。
一、实验过程
1.材料
电泳仪、水平式核酸电泳槽、紫外透射仪、0.5×TBE缓冲液、1.5%琼脂糖凝胶、DNA分子量标准、6×上样缓冲液、SYBR-green-I（北京百泰克生物技术有限公司）。
2.方法
将1.5%琼脂糖凝胶加热溶化均匀，冷却到60-70℃时，倒入封好的凝胶槽，厚度约3-5mm，在距板底0.5-1mm的位置放置样品梳，检查梳子齿间有无气泡，待冷却成形后取出梳子及隔板，放入水平槽内，缓冲液淹没过胶面1-2mm为止。样品中加1/5体积的上样缓冲液及1/10体积的SYBR-green-I工作液（用电泳缓冲液将10000×的SYBR GreenⅠ稀释100倍，即为SYBR GreenⅠ工作液），混匀，取10-15?l加入凝胶点样孔中，同时设立合适的DNA分子量标准物。接通电源，调节电压（电压<10V/cm），电泳30-60分钟后，将凝胶板取出，在紫外透射仪上观察结果。
3.结果
将电泳后的凝胶放在紫外分析仪中观察结果，可见清晰明亮的绿色核酸条带，便于进一步的实验结果分析。
二、讨论
“DNA的琼脂糖凝胶电泳”是生物化学实验必开的基础型实验。“DNA的分离、纯化和鉴定”在很多学校也是必开的综合性实验。这些涉及DNA的提纯及鉴定的实验，很多实验室都会用到高度灵敏的荧光染色剂溴化乙锭（Ethidium bromide，EB）对DNA进行染色。EB是强诱变剂，具有致癌性，由于学生人数多，实验分组多，EB的用量也相应增加，废弃EB的处理也给实验人员带来很多不便。学生操作的积极性也受到影响，教师通常直接完成制胶及上样操作，让学生观察实验结果。近些年，国内推出了多种新型核酸染料，如GoldViewna 、SYBR-green-I、Gelgreen等，SYBR-green-I是其中一种染料，它们均比EB毒性低，灵敏度高，荧光信号强，使用方便。这些核酸染料均可替代EB广泛使用，从而减少大量使用EB对人体的危害和对环境的污染。通过对本科生物化学进行实验教学，证明改进后的实验令学生操作方便，安全，实验现象明显，教学效果良好。
参考文献：
[1]常冰梅，张栋，李美宁，王惠珍，张悦红.一种新型核酸染料在琼脂糖凝胶电泳中的应用[J].现代预防医学，2010，37（19）.
[2]汪姝，李彪，刘惠民.四种核酸染料在琼脂糖凝胶电泳中的染色特性[J].吉林农业，2011（11）：74-74.
[3]黄庆，府伟灵，赵渝徽，等.核酸荧光染料在琼脂糖凝胶电泳中的染色特性[J].中华医院感染学，2006，16（11）.
[4]赵伟，方炳雄，牛宇杰，等.3种常见核酸染料的安全性和灵敏度研究[J].国际检验医学，2013，34（22）.
[5]刘阳，杨淑霞，赖翼，等.影响琼脂糖凝胶电泳条带扭曲程度的因素[J].生物学，2009，26（2）：70-72.
关键词：琼脂糖凝胶电泳；实验教学；改进
琼脂糖凝胶电泳是重组DNA研究中常用的技术。可用于分离、鉴定和纯化DNA片段。不同大小、不同形状和不同构象的DNA分子在相同的电泳条件下（如凝胶浓度、电流、电压、缓冲液等），有不同的迁移，所以可通过电泳使其分离。凝胶中的DNA可与荧光染料结合，在紫外灯下看到荧光条带，借此可分析实验结果。我院生化实验室一直用EB染料对DNA片段进行染色，EB染料具有染色效果好、性质稳定、易储存、价格便宜等优点，但其具有中等毒性，是一种强诱变剂，易对操作人员造成危害和对环境造成污染。为减少实验室有毒试剂的排放，本实验采用一种新型核酸染料SYBR-green-I代替EB，通过对教学实验的改进，取得了良好的教学效果。
一、实验过程
1.材料
电泳仪、水平式核酸电泳槽、紫外透射仪、0.5×TBE缓冲液、1.5%琼脂糖凝胶、DNA分子量标准、6×上样缓冲液、SYBR-green-I（北京百泰克生物技术有限公司）。
2.方法
将1.5%琼脂糖凝胶加热溶化均匀，冷却到60-70℃时，倒入封好的凝胶槽，厚度约3-5mm，在距板底0.5-1mm的位置放置样品梳，检查梳子齿间有无气泡，待冷却成形后取出梳子及隔板，放入水平槽内，缓冲液淹没过胶面1-2mm为止。样品中加1/5体积的上样缓冲液及1/10体积的SYBR-green-I工作液（用电泳缓冲液将10000×的SYBR GreenⅠ稀释100倍，即为SYBR GreenⅠ工作液），混匀，取10-15?l加入凝胶点样孔中，同时设立合适的DNA分子量标准物。接通电源，调节电压（电压<10V/cm），电泳30-60分钟后，将凝胶板取出，在紫外透射仪上观察结果。
3.结果
将电泳后的凝胶放在紫外分析仪中观察结果，可见清晰明亮的绿色核酸条带，便于进一步的实验结果分析。
二、讨论
“DNA的琼脂糖凝胶电泳”是生物化学实验必开的基础型实验。“DNA的分离、纯化和鉴定”在很多学校也是必开的综合性实验。这些涉及DNA的提纯及鉴定的实验，很多实验室都会用到高度灵敏的荧光染色剂溴化乙锭（Ethidium bromide，EB）对DNA进行染色。EB是强诱变剂，具有致癌性，由于学生人数多，实验分组多，EB的用量也相应增加，废弃EB的处理也给实验人员带来很多不便。学生操作的积极性也受到影响，教师通常直接完成制胶及上样操作，让学生观察实验结果。近些年，国内推出了多种新型核酸染料，如GoldViewna 、SYBR-green-I、Gelgreen等，SYBR-green-I是其中一种染料，它们均比EB毒性低，灵敏度高，荧光信号强，使用方便。这些核酸染料均可替代EB广泛使用，从而减少大量使用EB对人体的危害和对环境的污染。通过对本科生物化学进行实验教学，证明改进后的实验令学生操作方便，安全，实验现象明显，教学效果良好。
参考文献：
[1]常冰梅，张栋，李美宁，王惠珍，张悦红.一种新型核酸染料在琼脂糖凝胶电泳中的应用[J].现代预防医学，2010，37（19）.
[2]汪姝，李彪，刘惠民.四种核酸染料在琼脂糖凝胶电泳中的染色特性[J].吉林农业，2011（11）：74-74.
[3]黄庆，府伟灵，赵渝徽，等.核酸荧光染料在琼脂糖凝胶电泳中的染色特性[J].中华医院感染学，2006，16（11）.
[4]赵伟，方炳雄，牛宇杰，等.3种常见核酸染料的安全性和灵敏度研究[J].国际检验医学，2013，34（22）.
[5]刘阳，杨淑霞，赖翼，等.影响琼脂糖凝胶电泳条带扭曲程度的因素[J].生物学，2009，26（2）：70-72.