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目的 观察肿瘤选择性增殖腺病毒CNHK300对乳腺癌的选择性杀伤作用.方法用RT-PCR方法检测各种细胞株的端粒酶活性;CNHK300、ONYX-015(E1B 55 Kda蛋白缺失的2型和5型嵌合型腺病毒)、wtAd5(野生型腺病毒)分别行病毒增殖实验和细胞生长抑制实验,验证CNHK300选择性复制和杀伤能力;Weste Blot检测腺病毒E1A在细胞中的表达.结果乳腺癌细胞株MCF-7、BT-549和SK-BR-3端粒酶hTERT mRNA均为阳性表达,而正常成纤维细胞株MRC-5和BJ端粒酶hTERT mRNA为阴性.CNHK300在乳腺癌细胞MCF-7、BT-549和SK-BR-3中48 h复制倍数分别为40 625、1 265和20 000倍,与wtAd5的增殖能力相似,较ONYX-015增殖能力强,在MCF-7和BT-549细胞中复制能力甚至强于野生型腺病毒.然而,在正常成纤维细胞MRC-5和BJ中CNHK300病毒增殖能力减弱,48 h增殖倍数为63～192倍,而wtAd5增殖仍可高达3 160～4 846倍.CNHK300 MOI 10 PFU/cell作用7天,可有效杀伤半数乳腺癌细胞,与ONYX-015相比,CNHK300具有更强的肿瘤杀伤能力.CNHK300对正常成纤维细胞的杀伤力较wtAd5明显减弱,CNHK300在MOI 100 PFU/cell时BJ细胞存活率50％以上.正常成纤维细胞株中未检测到CNHK300 E1A基因表达,在293细胞和感染CNHK300的乳腺癌细胞株中能够检测到E1A基因表达.结论hTERT启动子可成功地调控腺病毒CNHK300选择性在端粒酶阳性的乳腺癌细胞中复制,并产生溶瘤作用.可望成为治疗乳癌的一种新的治疗策略.