利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中高效表达人胰岛素样生长因子-2(hIGF-2)

来源 :中国药科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yangyujie309
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目的:研制有生物活性的可溶性分泌型重组人胰岛素样生长因子-2(rhIGF-2).方法:将14 kD hIGF-2前体cDNA基因插入家蚕核型多角体病毒(BmNPV)转移载体pBakPAK8中,经与野生型病毒DNA共转染家蚕细胞后,通过体内同源重组的方式获得重组病毒BmNPV/IGF-2.以BmNPV/IGF-2感染5龄家蚕幼虫,分别在感染后24,48,72,96,108,120 h提取家蚕血淋巴液,以ELISA法测定不同时象家蚕血中IGF-2浓度,采用Western-blot分析鉴定IGF-2免疫学活性,MTT法观察其对NIH3T3细胞增殖的影响. 结果:ELISA测定显示,BmNPV/IGF-2感染家蚕幼虫96 h后IGF-2表达率最高,每毫升血淋巴中约含IGF-2 14 μg, Western-blot分析发现表达产物在蚕体内被加工成7.0 kD成熟hIGF-2,并对NIH3T3细胞具有良好促增殖效应,其促细胞生长能力明显优于来源于E.coli的IGF-2标准品.结论:本研究实现具有免疫学活性及生物学活性的rhIGF-2在家蚕杆状病毒表达系统的高效表达.
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