烟草马铃薯Y病毒病相关基因eIF4E的片段克隆及RNAi载体构建

来源 :中国农学通报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangbuhe
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以在植物体内转录出RNA沉默的高效诱导因子双链RNA(dsRNA)为目标,以感病烟草品种为材料,提取总RNA,根据已报道的eIF4E基因的核苷酸序列,在保守区域和差异区域分别设计特异性引物,采用RT-PCR克隆出eIF4E基因的目的片段。将正向目的基因用XbaⅠ和ClaⅠ切下,将所得基因片段与用同样酶切开的含内含子的载体pKAN相连,取名pK-S;用同样的方法,将反向目的基因用XhoⅠ和KpnⅠ切下,所得基因片段与用同样酶切开的pK-S相连,取名pK-SA,再用NotⅠ将包括Intron和正反向基因在内的
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