【摘 要】
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目的制备抗人CD30单克隆抗体并进行活性研究,为其作为抗体偶联药物的靶向运输载体提供研究依据。方法通过基因工程技术构建真核表达载体pIZDHL-CD30-Ig G,将质粒稳定转染CHO/
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所肿瘤室
【基金项目】
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“重大新药创制”国家科技重大专项（2014ZX09201042-003）,中国医学科学院医学与健康科技创新工程（2016-12M-3-013）
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目的制备抗人CD30单克隆抗体并进行活性研究,为其作为抗体偶联药物的靶向运输载体提供研究依据。方法通过基因工程技术构建真核表达载体pIZDHL-CD30-Ig G,将质粒稳定转染CHO/dh Fr~-细胞并筛选,获得稳定表达anti-CD30-IgG抗体的细胞株并纯化抗体,通过HPLC检测其纯度。ELISA、Biacore和流式细胞术实验检测anti-CD30-IgG的亲和活性;免疫荧光共聚焦实验观察其在肿瘤细胞的内吞情况;利用小动物活体成像技术研究抗体在NOD/SCID鼠移植瘤模型中的靶向性。结果成功构建了anti-CD30-IgG抗体的表达载体,并筛选出稳定表达的单克隆细胞株CHO-CD30-IgG,纯化后的抗体anti-CD30-IgG纯度达到98%以上。Anti-CD30-IgG与重组人CD30抗原具有很好的亲和活性,亲和常数为4.15×10~8 L/mol,其可通过肿瘤细胞表面CD30受体介导的内吞进入细胞。在NOD/SCID小鼠L540和Karpas299移植瘤模型中,anti-CD30-IgG可以选择性地富集并滞留在肿瘤部位。结论 Anti-CD30-IgG对抗原和肿瘤细胞具有高亲和性和特异性,并且可被内吞进入肿瘤细胞内部,在小鼠体内可选择性靶向并且长时间滞留在肿瘤部位,可作为抗体偶联药物中"弹头"部分的靶向输送载体。
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